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Investigação de mudanças conformacionais de bothropstoxina I (PLA2-Lys49) do veneno de Bothrops jararacussu em associação com membranas artificiais

Processo: 02/12746-2
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
Vigência (Início): 01 de março de 2004
Vigência (Término): 29 de fevereiro de 2008
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica
Pesquisador responsável:Richard John Ward
Beneficiário:Tatiana Lopes Ferreira
Instituição-sede: Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto (FFCLRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Assunto(s):Venenos de serpentes   Bothrops   Membranas artificiais   Fluorescência   Mutagênese sítio-dirigida   Triptofano

Resumo

As fosfolipases A2 (PLA2) catalisam a hidrólise Ca2+-dependente de ligações ácido-éster na posição sn-2 dos fosfolipídeos, liberando ácidos graxos e lisofosfolipídeos como produto. A botropstoxina I (BthTx-I) é uma PLA2-Lys49 isolada do veneno de Bothrops jararacussu que apresenta uma substituição do aminoácido ácido aspártico por lisina na posição 49 do sítio ativo, impedindo a ligação do cofator Ca2+, com a conseqüente perda do ciclo catalítico produtivo. Embora sem atividade catalítica, a interação de BthTx-I com lipossomos provoca uma liberação rápida do conteúdo aquoso dos mesmos. BthTx-I existe como homodímero em solução no pH 7,0, e experimentos de cristalografia de raio-X demonstram variações entre as conformações, "aberta" e "fechada". É desconhecida a mudança nas conformações da proteína quando em associação com a membrana, mas sugere-se um possível mecanismo no qual uma transição entre estas conformações causa rompimento da bicamada lipídica, explicando, sua atividade Ca2+-independente. O cDNA da BthTx-I foi isolado, seqüenciado e a proteína foi expressa em E. coli e purificada. Utilizando-se a técnica de mutagênese sitio-dirigida pretende-se produzir proteínas recombinantes com triptofanos únicos em diferentes regiões da molécula. A fluorescência intrínseca dos triptofanos será utilizada para avaliar o modelo proposto através do estudo das mudanças conformacionais da proteína em solução bem como quando em associação com membranas artificiais. (AU)

Publicações científicas (6)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
FONSECA-MALDONADO, RAQUEL; FERREIRA, TATIANA LOPES; WARD, RICHARD J. The bactericidal effect of human secreted group IID phospholipase A(2) results from both hydrolytic and non-hydrolytic activities. Biochimie, v. 94, n. 6, p. 1437-1440, JUN 2012. Citações Web of Science: 3.
ARAGAO, ELISANGELA APARECIDA; VIEIRA, DAVI SERRADELLA; CHIOATO, LUCIMARA; FERREIRA, TATIANA LOPES; LOURENZONI, MARCOS ROBERTO; SILVA, SAMUEL REGHIM; WARD, RICHARD JOHN. Characterization of suramin binding sites on the human group IIA secreted phospholipase A(2) by site-directed mutagenesis and molecular dynamics simulation. Archives of Biochemistry and Biophysics, v. 519, n. 1, p. 17-22, MAR 1 2012. Citações Web of Science: 0.
CHIOATO, LUCIMARA; ARAGAO, ELISANGELA APARECIDA; FERREIRA, TATIANA LOPES; WARD, RICHARD J. Active site mutants of human secreted Group IIA Phospholipase A(2) lacking hydrolytic activity retain their bactericidal effect. Biochimie, v. 94, n. 1, p. 132-136, JAN 2012. Citações Web of Science: 4.
FONSECA, RAQUEL GOMES; FERREIRA, TATIANA LOPES; WARD, RICHARD J. Refolding and purification of the human secreted group IID phospholipase A(2) expressed as inclusion bodies in Escherichia coli. Protein Expression and Purification, v. 67, n. 2, p. 82-87, OCT 2009. Citações Web of Science: 5.
FERREIRA, TATIANA LOPES; WARD, RICHARD J. The interaction of bothropstoxin-I (Lys49-PLA(2)) with liposome membranes. Toxicon, v. 54, n. 4, p. 525-530, SEP 15 2009. Citações Web of Science: 2.
FERREIRA, TATIANA LOPES; RULLER, ROBERTO; CHIOATO, LUCIMARA; WARD, RICHARD J. Insights on calcium-independent phospholipid membrane damage by Lys49-PLA(2) using tryptophan scanning mutagenesis of bothropstoxin-I from Bothrops jararacussu. Biochimie, v. 90, n. 9, p. 1397-1406, SEP 2008. Citações Web of Science: 11.

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