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Clonagem molecular e expressão da pa-bj, uma serinoendopeptidase com atividade agregante de plaquetas, isolada do veneno da serpente Bothrops Jararaca

Processo: 99/11012-0
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Mestrado
Vigência (Início): 01 de março de 2000
Vigência (Término): 17 de outubro de 2000
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
Pesquisador responsável:Antonio Carlos Martins de Camargo
Beneficiário:Sinval Estevam Gregorio de Souza
Instituição-sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:95/02850-1 - Processamento proteolítico de peptídeos bioativos e toxinas, AP.TEM
Assunto(s):Clonagem   Expressão de proteínas   Agregação plaquetária   Venenos

Resumo

A PA-BJ é uma serinoendopeptidase isolada do veneno da serpente Bothrops jararaca que promove ~70% de agregação plaquetária em plasma rico em plaquetas (PRP) na concentração 4x10-8 M, e -40% de agregação em suspensões de plaquetas lavadas na concentração 10-7 M. PA-BJ é uma glicoproteína básica e sua estrutura primária foi determinada por degradação de Edman da proteína intacta, bem como dos fragmentos obtidos pela quebra com brometo de cianogênio e pela proteólise limitada com várias enzimas. A proteína tem 232 resíduos de aminoácidos e apresenta um sítio de N-glicosilação e um sítio de O-glicosilação. A seqüência de aminoácidos apresenta maior grau de homologia com enzimas coagulantes tipo trombina de venenos de serpentes, e com a tripsina e a calicreína glandular, do que com a trombina. A PA-BJ é a única enzima com essa atividade biológica cuja estrutura primária foi determinada, não apresenta atividade coagulante, como a trombina, e se apresenta como excelente candidata para estudos sobre a interação de serinoendopeptidases com o receptor plaquetário de trombina, PAR 1.0s objetivos deste projeto são: 1- Clonagem molecular e análise da seqüência de um cDNA que codifique a PA-BJ. 2- Obtenção da PA-BJ recombinante com o objetivo de realizar mutações sítios-dirigidas, que possibilitem a análise das relações entre a estrutura química e... (AU)