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Identificação, clonagem, expressão, purificação e caracterização de lipoproteínas de Leptospira interrogans

Processo: 03/04511-8
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Vigência (Início): 01 de setembro de 2004
Vigência (Término): 31 de agosto de 2007
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Ana Lucia Tabet Oller Do Nascimento
Beneficiário:Fernanda de Oliveira Neves
Instituição-sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Clonagem   Leptospira interrogans   Purificação de proteínas   Lipoproteínas

Resumo

A leptospirose é uma zoonose bastante disseminada causada pela bactéria patogênica do gênero Leptospira. Leptospiras são bactérias móveis, de formato helicoidal, sorologicamente classificadas em mais de 200 sorovares (Faine et al,, 1999). A distribuição geográfica da leptospirose é principalmente cosmopolita. Os roedores desempenham o papel de principais reservatórios da doença, pois albergam a leptospira nos rins, eliminando as vivas no meio ambiente e, contaminando água, solo e alimentos. Anualmente são relatados a Fundação Nacional de Saúde (FUNASA/MS) cerca de 5.000 casos. O estudo e caracterização de proteínas envolvidas na patogenicidade de L. interrogans, como as lipoproteínas (Haake et al., 2000), deverá fornecer dados importantes para o desenvolvimento futuro de uma vacina contra a leptospirose. Neste sentido, o projeto propõe identificar no genotna de Leptospira interrogans sorovar Copenhageni (AEG/ONSA/FAPESP) e caracterizar 4 lipoproteínas. Estes genes serão amplificados a partir do DNA genômico de L. interrogans, e os insertos de DNA clonados em vetores apropriados utilizando E. coli como sistema hospedeiro de expressão. As proteínas recombinantes serão purificadas por cromatografia de afinidade a metal, analisadas quanto a sua estrutura pela técnica de dicroísmo circular e a imunogenicidade avaliada por Western blotting frente a soro de pacientes diagnosticados com leptospirose. (AU)