Clonagem, expressão e caracterização do gene da oxidase alternativa mitocondrial de Aspergillus fumigatus

• Processo: 03/09781-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Vigência (Início): 01 de agosto de 2004
• Vigência (Término): 31 de julho de 2008
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica
• Pesquisador responsável: Sergio Akira Uyemura
• Beneficiário: Taisa Magnani Dinamarco
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Aspergillus fumigatus Esferoplastos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Aspergillus Fumigatus | Caracterizacao Bioquimica | Esferoplastos | Expressao Heterologa | Mitocondria | Oxidade Alternativa

Resumo

O A. fumigatus é um fungo filamentoso e saprofítico, encontrado em todas as regiões do mundo. A principal forma de infecção ocorre através da inalação de conídios do fungo com predominância de infecções no trato respiratório, principalmente em pacientes imunocomprometidos. Muito pouco é conhecido sobre a bioenergética mitocondrial, entretanto, estudos preliminares de respiração mitocondrial, realizados em nosso laboratório, sugerem a presença de uma oxidase alternativa semelhante àquelas descritas em plantas, tripanosomas, amebas e outros organismos. A função dessa oxidase no metabolismo desses organismos não está totalmente elucidada, mas tem sido sugerido que as principais funções da via alternativa estejam ligadas à diferenciação celular, termogênese e manutenção da concentração de ubiquinona suficientemente oxidada prevenindo a auto-oxidação da ubiquinona reduzida e a subseqüente formação de espécies reativas de oxigênio. A fim de se elucidar o papel desta enzima, será realizada clonagem da oxidase alternativa de A. fumigatus, seqüenciamento e expressão em dois sistemas heterólogos: em bactérias para purificação da proteína e produção de anticorpos específicos anti-oxidase alternativa, os quais serão utilizados em Western blotting e em S. cerevisiae para a caracterização bioquímica dessa enzima através da sua expressão e produção de esferoplastos para estudos de respiração e potencial de membrana mitocondriais. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

SORIANI‚ FM; MARTINS‚ VP; MAGNANI‚ T.; TUDELLA‚ VG; CURTI‚ C.; UYEMURA‚ SA. A PMR1-like calcium ATPase of Aspergillus fumigatus: cloning‚ identification and functional expression in S. cerevisiae. YEAST, v. 22, n. 10, p. 813-824, 2005. (02/04152-5, 03/09781-3, 02/09600-6)

MAGNANI‚ T.; SORIANI‚ FM; MARTINS‚ VP; NASCIMENTO‚ AM; TUDELLA‚ VG; CURTI‚ C.; UYEMURA‚ SA. Cloning and functional expression of the mitochondrial alternative oxidase of Aspergillus fumigatus and its induction by oxidative stress. FEMS Microbiology Letters, v. 271, n. 2, p. 230-238, 2007. (05/51677-4, 03/09781-3, 02/09600-6)

MAGNANI, TAISA; SORIANI, FREDERICO MARIANETTI; MARTINS, VICENTE DE PAULO; DE FREITAS POLICARPO, ANNA CAROLINA; SORGI, CARLOS ARTERIO; FACCIOLI, LUCIA HELENA; CURTI, CARLOS; UYEMURA, SERGIO AKIRA. Silencing of mitochondrial alternative oxidase gene of Aspergillus fumigatus enhances reactive oxygen species production and killing of the fungus by macrophages. Journal of Bioenergetics and Biomembranes, v. 40, n. 6, p. 631-636, DEC 2008. (03/09781-3, 06/04909-0)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

DINAMARCO, Taisa Magnani. Clonagem, expressão e caracterização do gene da oxidase alternativa mitocrondial de Aspergilus fumigatus. 2008. Tese de Doutorado - Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (PCARP/BC) Ribeirão Preto.