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Construção de novos vetores plasmidiais para a produção de proteínas heterólogas em Bacillus subtilis

Processo: 04/02330-9
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Mestrado
Vigência (Início): 01 de agosto de 2004
Vigência (Término): 31 de julho de 2005
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
Pesquisador responsável:Luis Carlos de Souza Ferreira
Beneficiário:Wilson Barros Luiz
Instituição-sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Bacillus subtilis   alfa-Amilases   Expressão de proteínas

Resumo

A expressão de proteínas recombinantes em sistemas de expressão baseados em linhagens bacterianas representa uma das abordagens experimentais mais disseminadas, e necessárias, entre profissionais e alunos que atuam nas mais diferentes áreas da pesquisa moderna. Neste trabalho propomos construir novos sistemas de expressão para proteínas recombinantes a partir de linhagens geneticamente modificadas de Bacillus subtilis. Vetores de expressão, derivados de plasmídeos capazes de se replicarem de forma estável em B. subtilis, serão empregados, juntamente com promotores ativados por diferentes estímulos, como uma alternativa para a expressão de proteínas heterólogas em bactérias. Serão empregados os promotores derivados dos genes gsiB, lepA, xylE e spac, clonados no plasmideo pMTLs72, para promover a expressão da enzima b-gaiactosidase. A partir desses novos vetores serão avaliadas à capacidade de promover a expressão intracelular de proteínas de forma estável e em quantidade conhecida. Em uma segunda fase do trabalho, serão construídos novos vetores capazes de promover a secreção de proteínas heterólogas para o meio extracelular, a partir da clonagem do peptídeo sinal derivado do gene amyE, responsável pela síntese da enzima a-amilase. Acreditamos que a execução do presente projeto representará uma contribuição significativa para todos aqueles envolvidos com a produção e purificação de proteínas recombinantes. (AU)