Análise dos efeitos citotóxicos de componentes purificados do veneno da aranha Phoneutria nigriventer sobre células tumorais: Analysis of the cytotoxic effects of purified components from Phoneutria nigriventer spider venom on tumor cells

Autor(es)

Marcus Vinícius Campoy Chichizola Caballero Alves

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
• Data de defesa: 2020-12-10

Membros da banca

Catarina Raposo Dias Carneiro; Laura de Oliveira Nascimento; Maria Helena Rodrigues Mesquita Britto

• Orientador: Catarina Raposo Dias Carneiro

Resumo

Gliomas são o tipo de tumor primário mais comumente encontrado no cérebro, originados de células progenitoras neuronais ou de células da glia transformadas. Os gliomas de grau IV são denominados glioblastomas (GBs), que correspondem a mais de 50% dos gliomas e são caracterizados pela sua alta taxa de mortalidade. Por ser uma doença multifatorial e complexa, o tratamento do câncer é um grande desafio e os GBs representam um desafio à parte em termos de terapia e prognóstico; portanto, o desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas apresenta grande relevância social. Venenos animais contém em sua composição moléculas biologicamente ativas com alvos específicos em células e tecidos. A terapêutica baseada em peptídeos, uma das principais classes de moléculas presentes em venenos de aranhas, é um vasto e promissor campo para agentes com ação antineoplásticas emergentes. Recentemente, nosso grupo de pesquisa demonstrou que o veneno da aranha Phoneutria nigriventer (PnV) possui efeitos citotóxicos em linhagens de GB. Dando continuidade, o presente estudo tem como objetivo selecionar componentes purificados do veneno com efeito sobre a viabilidade/morte, ciclo celular e proliferação da linhagem de GB humano NG97, bem como contribuir para esclarecer o mecanismo de ação por trás desses efeitos, investigando proteínas relacionadas ao controle da proliferação (mTOR) e da apoptose (BCL-2 e BAX). As células foram tratadas primeiramente com as frações purificadas do PnV: F1 (menor que 3kDa), F2 (entre 3 e 10 kDa) e F3 (maior que 10 kDa). A partir desses resultados, as frações F1+F2 (baixo peso) foram repurificadas, obtendo 11 subfrações (SF1 ¿ SF11). Os tratamentos foram feitos durante 1, 5, 24 e/ou 72 h e, em seguida, ensaios de viabilidade (MTT), proliferação (CFSE), morte (Anexina V/iodeto de propídeo - IP) e ciclo celular (IP) foram utilizados; um inibidor de mTOR (rapamicina, um fármaco já utilizado para tratamento de várias neoplasias) foi utilizado nos experimentos com as SFs e, por fim, foi feito western blotting para BCL-2 e BAX. As frações F1 e F2 apresentaram efeitos mais relevantes nos parâmetros observados e foram repurificadas em subfrações (SF1 ¿ SF11); dessas, as SFs3 e 4 foram as que apresentaram efeitos antitumorais mais significativos. A inibição previa da mTOR pela rapamicina teve efeito sinérgico às SFs, reduzindo ainda mais significativamente a viabilidade celular em relação ao controle não tratado. A proteína BAX, relacionada à indução de apoptose, foi aumentada pelas SFs3 e 4 e ainda mais expressa quando a mTOR foi inibida, corroborando com o efeito sinérgico dos fármacos. A BCL-2, relacionada a mecanismos anti-apoptóticos, foi reduzida pelas SFs e não houve diferença quando a rapamicina foi utilizada previamente. Portanto, tomados em conjunto, os resultados apontam para componentes presentes nas SFs3 e 4 como potenciais protótipos para o desenvolvimento de novos fármacos para o tratamento de GB e indicam que esses compostos podem ser utilizados em terapia combinada associados à rapamicina. Estudos futuros serão conduzidos para caracterizar e sintetizar as moléculas e avaliar a eficácia e segurança em modelos pré-clínicos (AU)

• Processo FAPESP: 17/24331-7 - Análise do efeito e mecanismo de ação do veneno de P. nigriventer e de suas toxinas isoladas na involução de tumor cerebral implantado em camundongo
• Beneficiário: Marcus Vinícius Campoy Chichizola Caballero Alves
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado