Estudo de transcritos induzidos pela gestação inicial em células imunes do sangue periférico de fêmeas bovinas

Autor(es)

Cecília Constantino Rocha

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: São Paulo.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ/SBD)
• Data de defesa: 2019-12-20

Membros da banca

Guilherme Pugliesi; Luisa Cunha Carneiro; Mateus Jose Sudano

• Orientador: Guilherme Pugliesi

Resumo

Em bovinos grande parte das perdas embrionárias ocorrem até as três primeiras semanas de gestação. Estuda-las e detecta-las o mais precocemente, são importantes pontos para melhorar a eficiência reprodutiva. O fato do concepto possuir 50% do material genético estranho ao sistema imune materno, evidencia a importância de elucidar os acontecimentos imunes nesse período inicial. Além disso, nesse momento, a principal glicoproteína sinalizadora do concepto (IFN- τ) é liberada na circulação e estimula a expressão de genes (ISGs). O estudo da expressão gênica dos mais comuns ISGs (ISG15, OAS1, MX1 e MX2) em células imunes do sangue periférico já foi utilizado como forma de diagnóstico precoce de gestação, entretanto a acurácia foi baixa. Considerando-se a deficiência de pesquisas sobre a imunologia de gestação. Testou-se as hipóteses de que (1) no dia 18 de gestação novos genes além dos tradicionais ISGs seriam diferencialmente expressos (DE) em células imunes de animais gestantes e não gestantes, que permitiriam a seleção de potenciais marcadores da gestação antes do dia 20. E (2) que os genes DE descobertos, estariam relacionados com vias da resposta imunológica as quais seriam diferencialmente expressas entre categoria animal de paridade, mas regulada em ambas subespécies (taurus e indicus). Esta dissertação consiste de 2 estudos. O primeiro estudo foi realizado para detecção de novos genes através da técnica de sequenciamento de RNA (RNAseq). Para isso foi utilizado células mononucleares do sangue periférico (PBMC) de novilhas Nelore, no dia 18 após a inseminação artificial (AI) em tempo fixo. O perfil de transcritos selecionados, foram estudados em PBMC e células polimorfonucleares do sangue periférico (PMN) entre os dias 10 e 20 após a IA por qPCR. Conclui-se que dos 20 genes avaliados, 9 demonstraram-se potenciais marcadores da gestação em PBMC e 5 em PMN. No segundo estudo os resultados de RNAseq foram submetidos a analises de enriquecimento (GO, KEGG e score de regulação de vias) para a elucidação das principais vias no início da gestação. Os genes pertencentes a via selecionada foram validados no sangue total de vacas e novilhas Holandesas nos dias 16, 19 e 23 após inseminação. Outro experimento in vitro foi realizado, para testar se a via era estimulada por IFN-τ. Para isso cortes endometriais foram cultivados com meio de cultura, PBS e IFN-τ por 2 e 24 horas. Como resultados a via de receptores de reconhecimento de padrões (PRRs) foi a mais significativa e consequentemente avaliada. De 18 genes avaliados sete apresentaram interação entre status gestacional, categoria animal e tempo, os quais estão envolvidos com receptores Toll like e Nod like. A interação aconteceu por aumento de expressão no dia 23 em novilhas gestantes. Entretanto os resultados do experimento in vitro apresentaram efeitos de cultivo para todos os grupos, impossibilitando definir se os genes estudados são estimulados por IFN-τ. Conclui-se que a gestação inicial exerce influência sobre o sistema imune de novilhas de corte e de leite, diferentemente de vacas. E que a diferença entre categorias acontece no período após a implantação (D23). Sendo assim, aceitamos a hipótese de que novos transcritos além dos tradicionais ISGs podem ser utilizados como marcadores de gestação e que a principal via em células imunes durante a gestação está relacionada a resposta imune, a qual é regulada em ambas subespécies e diferencialmente expressa entre categorias de paridade. (AU)

• Processo FAPESP: 17/13994-5 - Estudo do perfil transcriptômico em células imunes do sangue periférico no início da gestação em novilhas de corte
• Beneficiário: Cecilia Constantino Rocha
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado