Busca avançada
Ano de início
Entree


Avaliação dos efeitos da radiação gama na expressão de genes reguladores da recombinação V(D)J de receptores de células T

Autor(es):
Cardoso, Renato Sousa
Número total de Autores: 1
Tipo de documento: Tese de Doutorado
Imprenta: Ribeirão Preto. [2004]. 172 f.
Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto
Data de defesa:
Membros da banca:
Passos, Geraldo Aleixo Silva; Espreafico, Enilza Maria; Silva, Flávio Henrique; Brentani, Helena Paula; Paço-Larson, Maria Luisa
Orientador: Passos, Geraldo Aleixo Silva
Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Imunologia
Indexada em: Banco de Dados Bibliográficos da USP-DEDALUS
Localização: Universidade de São Paulo. Biblioteca Central do Campus de Ribeirão Preto; FMRP/Cardoso, Renato Sousa
Resumo

A análise funcional do desenvolvimento de células T tornou-se possível após a padronização do método de timo fetal in vitro (FTOC) no qual a estrutura tridimensional do timo, que é muito importante para a sua maturação, é mantida. Uma vez que a radiação ionizante afeta o desenvolvimento das células T, o objetivo deste estudo foi avaliar se a radiação modula a recombinação V(D)J VB8.1-BDJ2.1 no modelo FTOC e buscar genes candidatos a estarem envolvidos nesse processo. O timo fetal de Balb-c 13-15 pc foi cultivado por dois dias (d=2), mimetizando os dias 15-17 do desenvolvimento in vivo. O timo dos fetos 15pc foi cultivado também por 5 dias (d=5), imitando o 20º dia de desenvolvimento in vivo. Imediatamente após o estabelecimento da cultura os FTOCs foram irradiados com 4 Gy de raios gama. A morte celular foi analisada ao microscópio de epi-fluorescêcia para avaliar a viabilidade do FTOC. As freqüências de células apoptóticas e necróticas não mostraram alterações significativas. Um método semi-quantitativo baseado em PCR foi desenvolvido para se detectar e quantificar a recombinação entre VB8.1-BDJ2.1. A expressão diferencial de mRNA foi avaliada usando microarrays de cDNA em membranas de nylon, contendo um total de 9.216 seqüências gênicas. Verificou-se que a radiação ionizante não influenciou a emergência da recombinação V(D)J, mas foi capaz de aumentar a quantidade de segmento recombinado de DNA em 5dFTOC15pc. A análise de padrões de expressão gênica por microarray mostrou que dentre as 9216 seqüências testadas foi possível detectar a presença de genes diferencialmente expressos para comparações pareadas entre os diferentes dias de desenvolvimento ou a resposta à radiação. Foi demonstrado que genes de diversas classes foram reprimidos nos estágios de desenvolvimento posteriores à emergência de recombinação V(D)J... (AU)

Processo FAPESP: 00/09994-9 - Avaliação dos efeitos da radiação gama na expressão de genes reguladores da recombinação V(D)J de receptores de células T (TCR V beta 8.1)
Beneficiário:Renato Sousa Cardoso
Linha de fomento: Bolsas no Brasil - Doutorado