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Determinação das regiões de recombinação em haplotipos atipicos de pacientes com anemia falciforme

Autor(es):
Alexandra Patricia Zilli Vieira
Número total de Autores: 1
Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências Médicas
Data de defesa:
Membros da banca:
Sandra Fatima Menosi Gualandro; Maria de Fatima Sonati
Orientador: Fernando Ferreira Costa
Resumo

O complexo da globina beta humana compreende uma região de 70 kb e contém numerosos polimorfismos. O conjunto desses polimorfismos está em desequilíbrio de ligação com o gene da globina `beta POT. S´ e são denominados de haplótipos. O estudo desses haplótipos mostrou que a mutação da globina `beta POT. S´ teve origens independentes em diferentes regiões. Essas regiões dão a denominação aos haplótipos, desta forma os haplótipos clássicos são Bantu, Benin, Senegal, Camarões e Indiano. Nesse estudo foram caracterizados, do ponto de vista molecular, 13 pacientes que apresentaram haplótipos atípicos. Este estudo possibilitou a caracterização desses haplótipos e, nos casos de recombinação, permitiu identificar a região do provável ponto de quebra. Os haplótipos foram determinados pela análise dos seguintes sítios para RFLP: XMn I - 5' gene `gama G´, Hind III- `psi G´ e `psi A´, Hinc II - `psi beta´, Hinf I - 5' `beta´ e Ava II - `beta´. Adicionalmente, foram selecionadas 3 regiões de repetições de dinucleotídeos, ao longo do "cluster" da globina beta - no interior do LCR-HS2 (repetição de TA), entre o LCR e o gene `epsilon´ (repetição CA) e no interior, do segundo intron do gene `gama G´ (repetição TG). Essas regiões foram analisadas por PCR radioativo e observadas em gel de poliacrilamida desnaturante. Regiões microsatélites são comumente usadas como marcadores polimórficos, porém seu papel funcional é fracamente documentado. Além disso, foram estudadas outras seqüências: 3 localizadas em uma região de 8 kb entre LCR-HS2 e o gene `epsilon´; uma localizada 5' do gene `beta´ e outra localizada 3' do gene `beta´, no sítio hipersensível 3' (HS3'), por SSCP não radioativo. Foram também caracterizadas por sequenciamento a região de repetição localizada entre LCR e o gene `epsilon´ (repetição CA) e também uma região de repetição localizada na posição ?530 5' do gene `beta´- (AT)xTy. Em 8 dos 13 alelos analisados, o ponto de quebra da recombinação ocorreu dentro de uma região de 2 kb entre LCR e gene `epsilon´ - 7 alelos revelaram. um haplótipo híbrido Bantu/Benin e 1 revelou o híbrido Bantu/Senegal. Em 3 outros casos nós observamos dois pontos de quebra no mesmo alelo - um localizado dentro de uma região de 2 kb entre LCR e o gene `epsilon´ e o segundo localizado entre os genes `delta´ e `beta´. ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital (AU)

Processo FAPESP: 98/11592-4 - Recombinação gênica do complexo da globina beta: determinação dos pontos de quebra e sua relação com a diversidade fenotípica da anemia falciforme
Beneficiário:Alexandra Patricia Zilli Vieira
Linha de fomento: Bolsas no Brasil - Mestrado