Influência do flúor na acidogenicidade, concentração de polissacarídeos e diversidade genotípica de estreptococos do grupo mutans no biofilme dental detectados por AP-PCR: estudo in situ

Resumo

Apesar do efeito antimicrobiano do Flúor (F) ser bem conhecido, não há evidências de uma possível ação deste elemento na diversidade genotípica de Streptococcus mutans. Assim, o objetivo do presente trabalho é avaliar a influência do F na acidogenicidade, na concentração de polissacarídeos e na diversidade genotípica de S. mutans no biofilme dental formado in situ. Para isso, um estudo in situ cruzado será conduzido e 16 voluntários adultos usarão um dispositivo intra-oral palatino contendo blocos de esmalte humano hígido, sendo submetidos a 4 grupos de tratamentos: (1) Dentifrício não fluoretado; (2) Dentifrício contendo 1100 ppm de F na forma de NaF; (3) Aplicação tópica de F + dentifrício não fluoretado; (4) Aplicação tópica de F + dentifrício fluoretado. A aplicação tópica de F será realizada no 1º. dia de cada fase experimental. Os voluntários deverão escovar os dispositivos 3x/dia com os dentifrícios designados para cada fase e gotejar água destilada deionizada ou uma solução de sacarose 20% 8x/dia para simular um desafio cariogênico. Ao final de 7 dias será determinada a acidogenicidade do biofilme e no 8º. dia, o biofilme será coletado para as análises microbiológica e bioquímica. Para a análise microbiológica, as amostras do biofilme dental e saliva dos voluntários serão inoculadas em meio MSB. Oito colônias típicas dos estreptococos do grupo mutans de cada amostra de biofilme dental e saliva serão isolados e então será realizada a extração de DNA desses microrganismos. Será realizada uma reação de PCR com “primers” específicos para identificação dos S. mutans. Então, será realizado o AP-PCR com o “primer” arbitrário OPA-02 e os produtos resultantes de ambas amplificações serão analisados em gel de agarose 1,5%. A documentação fotográfica dos géis será realizada em um sistema de imagem digital e analisada por um programa de computador, para a determinação da mobilidade relativa de cada banda. A análise bioquímica consistirá na determinação da concentração de polissacarídeos extra e intracelulares após extração por meio de método colorimétrico. Os genótipos representativos encontrados na saliva e no biofilme dental formados nos tratamentos descritos acima serão avaliados quanto à viabilidade celular em pH 5,0 e 2,8; atividade de F-ATPase e produção de ácidos. (AU)