Mecanismos moleculares da dor na artrite: identificação de novos alvos para o desenvolvimento de fármacos

Resumo

A modulação transcricional de genes relacionados a dor serão analisados por arrays de RT-PCR, em co-culturas de neuroesferas (neurônios, células das glia e células de Schwan) em 3D e células do microambiente da articulação (condrócitos, sinoviócitos e macrófagos). O modelo de co-cultura permite a modelagem in vitro do complexo ambiente de articulação e de nociceptores periféricos. As co-culturas serão submetidas a inflamação utilizando interleucina-6 (IL-6) e prostaglandina (PGE). A modulação da expressão de neuropeptídios e receptores conhecidos por estarem associados ao desenvolvimento da dor (NGF, BDNF, TRK) serão avaliadas por expressão gênica e análise de imunofluorescência em modelo 3D de neuroesferas. Subsequentemente, um painel de genes associados a dor inflamatória, hiper-excitabilidade neuronal, sensibilização e atividade neuronal espontânea serão analisados in vitro por meio da expressão gênica e western blotting para os seguintes alvos moleculares associados a dor: mu-opioid, DOR, mGluR, NR2B, TRP, CB1, FAAH, B2, ASIC, EP, COX, mPGEs, TNFR, P2X, NaV, TrKA, TrKB. Serão também avaliadas alterações de marcadores de atividade da medula espinhal relacionadas à dor crônica na artrite, por meio da análise de mediadores, receptores, canais e enzimas envolvidos neste processo, incluindo: EP, COX, mPGES, mGluR, NR2B, CCR, CXaCR1, P2x, T-type Ca2+. Marcadores de neuroinflamação (TNF, IL-1b), de modulação neuro-imune e controle neuronal do metabolismo ósseo (glutamato, subP, CGRP, GABA) serão também investigados. A via esfingomielina-ceramida envolvida na dor crônica e recentemente descrita e caracterizada por metabolômica sistêmica será também analisada na fase inicial deste projeto. A regulação ("up" e "down") dessas vias metabólicas, associada a alterações na formação de mielina e morte celular programada, bem como os efeitos causados pela ativação de astrócitos e a liberação de citocinas (IL-1 e MCP-1) envolvidas em inflamação e dor, serão também investigados. Subsequentemente, os alvos moleculares identificados poderão ser avaliados em modelos experimentais para a forma mais comum de artrite, denominada osteoartrite (AO). (AU)