Caracterização do canal de cálcio ativado por depleção (CRAC) no patógeno humano Schistosoma mansoni através do estudo de seus componente, as proteínas STIM e ORAI

Resumo

O presente projeto tem como objetivo o estudo de proteínas que formam um canal de cálcio no importante patógeno humano Schistosoma mansoni (STIM e ORAI), com a finalidade de compreender os mecanismos de ativação do canal CRAC (Calcium release-activated channel) no parasita. A associação de septinas a este canal também será investigada através do comprometimento de sua dinâmica (usando FCF) e avaliação do efeito causado no canal CRAC, que será reconstituído em sistema recombinante. As atividades descritas serão realizadas por Ana Eliza Zeraik durante sua estadia proposta de um ano no La Jolla Institute for Allergy and Immunology, sob a supervisão do Prof. Patrick Hogan. Duas abordagens serão utilizadas no estudo do canal CRAC de S. mansoni: na primeira todos os componentes serão expressos em células de mamíferos e na segunda o canal será reconstituído em lipossomos, para isso ORAI será expressa em S. cerevisiae e várias construções citoplasmáticas de STIM serão utilizadas para ativar o canal, algumas das quais já foram produzidas por nós em E. coli. Tais experimentos irão nos permitir o estudo detalhado da interação de ORAI com STIM e sua influência no transporte de cálcio. Ca2+ é um íon essencial para diversos processos biológicos e está envolvido em inúmeros processos de sinalização. Há uma divergência significativa nas sequências de STIM e ORAI de S. mansoni, quando comparadas com as ortólogas humanas, e muitos agentes antiparasitários alteram a homeostase de Ca2+, tal como o único medicamento disponível contra esquistossomose, desta forma a caracterização deste canal de cálcio em schistosomas pode revelar novos potenciais alvos contra esquistossomose. Devido às dificuldades inerentes em se trabalhar com STIM e ORAI, a experiência do Prof. Hogan e a infraestrutura do La Jolla Institute serão fundamentais para o sucesso do presente projeto.