Avaliação dos efeitos imunomodulatórios e antifúngicos do ácido caféico (CA), do éster fenetil do ácido caféico (CAPE) e da artepillin C (ARC) sobre C. albicans e desenvolvimento de candidose em modelos hospedeiros in vivo

Resumo

Atualmente, as opções de tratamento para as infecções fúngicas, como a candidose bucal, apresentam limitações devido à baixa disponibilidade de drogas antifúngicas e ao surgimento de cepas resistentes aos medicamentos. Assim, o desenvolvimento de novos compostos antifúngicos e novas abordagens terapêuticas são de grande necessidade para o controle dessas infecções. Alguns constituintes da própolis como o ácido caféico (CA), o éster fenetil do ácido caféico (CAPE) e a artepillin C (ARC), são considerados compostos antimicrobianos promissores por possuirem atividade antifúngica e antibacteriana, bem como ação imunomodulatora e anti-inflamatória por meio da inibição do fator transcricional NF-kB e de enzimas envolvidas no processo inflamatório. Portanto, o presente trabalho tem como objetivo determinar se CA, CAPE e ARC são capazes de estimular o sistema imunológico contra C. albicans e inibir o desenvolvimento de candidose em modelos experimentais in vivo. Inicialmente, 40 cepas clínicas de C. albicans, isoladas da cavidade bucal de pacientes portadores do Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV), serão submetidas ao teste de Concentração Inibitória Mínima (CIM) para fluconazol, anfotericina, CA, CAPE e ARC. O efeito antifúngico desses compostos será verificado em duas cepas resistentes ao fluconazol através dos ensaios in vitro de formação de biofilme e filamentação. Ainda in vitro, será investigada a ação imunomoduladora dos compostos, utilizando células RAW264.7 ativadas por Candida para quantificação de citocinas por meio de microesferas (beads) marcadas com fluorescência. A seguir, os efeitos profiláticos e terapêuticos do CA, do CAPE e da ARC serão investigados no modelo experimental em Galleria mellonella através da análise da curva de sobrevivência, contagem de hemócitos, caracterização celular dos hemócitos por citometria de fluxo, contagem de C.albicans do corpo gorduroso e expressão de genes relacionados aos peptídeos antimicrobianos (galiomicina, galleriomicina, cepropina D), á fagocitose (C8- Contig 1910) e á regulação de citocinas e da cascata NF-kB (C7 Contig 15362) presentes na resposta imune desse modelo de invertebrado. Diante disso, o composto com melhor efeito antifúngico e imunomodulatório nos testes anteriores, será selecionado com o propósito de expandir e comprovar tais efeitos no modelo experimental de candidose oral induzida em camundongos. Esse composto será aplicado sobre lesões de candidose induzidas no dorso da língua dos animais. O desenvolvimento da candidose oral será monitorado por meio de recuperação de C. albicans da cavidade bucal dos animais, avaliação macroscópica, análise histológica e expressão de gênica de ²-defensinas 1 e 3. Os resultados serão submetidos a uma análise exploratória para a seleção do teste estatístico mais adequado para cada experimento desse estudo (P d 0,05).