Estrutura da secretina do pilus tipo IV de Xanthomonas citri

Resumo

Pili tipo IV (T4P) são filamentos extracelulares retráteis de bactérias que permitem sua motilidade e orientação sobre superfícies. Em espécies de Xanthomonas, um gênero notório por seus membros fitopatogênicos, T4P foi associado com processos de formação de biofilmes, adesão, e virulência. A maquinaria de secreção de T4P em Xanthomonas é um grande complexo de proteínas que atravessa as membranas da célula, por onde as subunidades do pilus são polimerizadas e translocadas ao meio extracelular. Este projeto de doutorado visa estudar o subcomplexo secretina que forma o canal na membrana externa por onde cruza o filamento. Para isto, será determinada sua estrutura tridimensional detalhada através da técnica de criomicroscopia eletrônica (cryo-EM). A secretina é constituída por PilQ, que se multimeriza para formar o canal. Esta proteína será clonada em vetores para adição de etiquetas de purificação e expressa, paralelamente, in vivo (em Xanthomonas citri pv. citri 306) e heterologamente em E. coli. Seu gene correspondente será deletado e complementado com os vetores, e será aferido se assim foram mantidas as propriedades fenotípicas in vivo da maquinaria de T4P editada. A secretina será purificada destas culturas e caracterizada por SEC-MALS e microscopia eletrônica de transmissão antes de ser levadas para cryo-EM para a determinação da sua estrutura. Por fim, se espera obter um modelo deste complexo essencial para T4P que direcionará futuros estudos em Xanthomonas. (AU)