Single Chain Variable Fragments Produced in Escherichia coli against Heat-Labile and Heat-Stable Toxins from Enterotoxigenic E-coli

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Ozaki, Christiane Y. ^[1] ; Silveira, Caio R. F. ^[1] ; Andrade, Fernanda B. ^[1] ; Nepomuceno, Roberto ^[1] ; Silva, Anderson ^[1] ; Munhoz, Danielle D. ^[1] ; Yamamoto, Bruno B. ^[1] ; Luz, Daniela ^[1] ; Abreu, Patricia A. E. ^[1] ; Horton, Denise S. P. Q. ^[1] ; Elias, Waldir P. ^[1] ; Ramos, Oscar H. P. ^[2] ; Piazza, Roxane M. F. ^[1]

Afiliação do(s) autor(es)

^[1] Inst Butantan, Bacteriol Lab, Sao Paulo, SP - Brazil

^[2] CEA, iBiTecs, SIMOPRO, Gif Sur Yvette - France

• Tipo de documento: Artigo Científico
• Fonte: PLoS One; v. 10, n. 7 JUL 8 2015.
• Citações Web of Science: 2

Resumo

Background Diarrhea is a prevalent pathological condition frequently associated to the colonization of the small intestine by enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) strains, known to be endemic in developing countries. These strains can produce two enterotoxins associated with the manifestation of clinical symptoms that can be used to detect these pathogens. Although several detection tests have been developed, minimally equipped laboratories are still in need of simple and cost-effective methods. With the aim to contribute to the development of such diagnostic approaches, we describe here two mouse hybridoma-derived single chain fragment variable (scFv) that were produced in E. coli against enterotoxins of ETEC strains. Methods and Findings Recombinant scFv were developed against ETEC heat-labile toxin (LT) and heat-stable toxin (ST), from previously isolated hybridoma clones. This work reports their design, construction, molecular and functional characterization against LT and ST toxins. Both antibody fragments were able to recognize the cell-interacting toxins by immunofluorescence, the purified toxins by ELISA and also LT-, ST-and LT/ST-producing ETEC strains. Conclusion The developed recombinant scFvs against LT and ST constitute promising starting point for simple and cost-effective ETEC diagnosis. (AU)

• Processo FAPESP: 11/12928-2 - Novo desafio para o diagnóstico de Escherichia coli diarreiogênica: obtenção de anticorpos recombinantes contra diferentes fatores de virulência
• Beneficiário: Roxane Maria Fontes Piazza
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Processo FAPESP: 10/14659-6 - Obtenção e caracterização de anticorpos monoclonais recombinantes (scFv) contra a toxina termo-estável (st) de Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC)
• Beneficiário: Caio Raony Farina Silveira
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Processo FAPESP: 06/60258-8 - Abevo - (antibodies evolution): sistema inteligente para o desenvolvimento de anticorpos baseado na estrutura do antígeno
• Beneficiário: Christiane Yumi Ozaki
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Processo FAPESP: 11/22108-2 - Clonagem e purificação de anticorpos recombinantes contra diferentes fatores de virulência de Escherichia coli diarreiogênica
• Beneficiário: Anderson da Silva
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Processo FAPESP: 11/24111-0 - Otimização da expressão e purificação do anticorpo recombinante (scFv) contra a toxina termo-lábil (LT) de Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC)
• Beneficiário: Danielle Dias Munhoz
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Processo FAPESP: 04/08297-3 - AbEvo - (Antibodies Evolution): sistema inteligente para o desenvolvimento de anticorpos baseado na estrutura do antígeno
• Beneficiário: Oscar Henrique Pereira Ramos
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Pesquisa Inovativa em Pequenas Empresas - PIPE