Engineering increased thermostability in the GH-10 endo-1,4-beta-xylanase from Thermoascus aurantiacus CBMAI 756

Autor(es)

de Souza, Angelica R. ; de Araujo, Gabriela C. ; Zanphorlin, Leticia M. ; Ruller, Roberto ; Franco, Fernanda C. ; Torres, Fernando A. G. ; Mertens, Jeffrey A. ; Bowman, Michael J. ; Gomes, Eleni ; Da Silva, Roberto

• Tipo de documento: Artigo Científico
• Fonte: International Journal of Biological Macromolecules; v. 93, n. A, p. 20-26, DEC 2016.
• Citações Web of Science: 9

Resumo

The GH10 endo-xylanase from Thermoascus aurantiacus CBMAI 756 (XynA) is industrially attractive due to its considerable thermostability and high specific activity. Considering the possibility of a further improvement in thermostability, eleven mutants were created in the present study via site-directed mutagenesis using XynA as a template. XynA and its mutants were successfully overexpressed in Escherichia coli Rosetta-gami DE3 and purified, exhibiting maximum xylanolytic activity at pH 5 and 65 degrees C. Three of the eleven mutants, Q158R, H209N, and N257D, demonstrated increased thermostability relative to the wild type at 70 degrees C and 75 C.Q158R and N257D were stable in the pH range 5.0-10.0, while WT and H209N were stable from pH 8-10. CD analysis demonstrated that the WT and the three mutant enzymes were expressed in a folded form. H209N was the most thermostable mutant, showing a Tm of 71.3 degrees C. Molecular dynamics modeling analyses suggest that the increase in H209N thermostability may beattributed to a higher number of short helices and salt bridges, which displayed a positive charge in the catalytic core, stabilizing its tertiary structure. (C) 2016 Elsevier B.V. All rights reserved. (AU)

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