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(Referência obtida automaticamente do Web of Science, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores.)

Differences in the Detection of BrdU/EdU Incorporation Assays Alter the Calculation for G1, S, and G2 Phases of the Cell Cycle in Trypanosomatids

Texto completo
Autor(es):
da Silva, Marcelo Santos [1] ; Marin Munoz, Paula Andrea [1] ; Armelin, Hugo Aguirre [1] ; Elias, Maria Carolina [1]
Número total de Autores: 4
Afiliação do(s) autor(es):
[1] Butantan Inst, Lab Especial Ciclo Celular, Ctr Toxins Immune Response & Cell Signaling CeTIC, 1500 Vital Brasil Ave, BR-05503900 Sao Paulo - Brazil
Número total de Afiliações: 1
Tipo de documento: Artigo Científico
Fonte: Journal of Eukaryotic Microbiology; v. 64, n. 6, p. 756-770, NOV-DEC 2017.
Citações Web of Science: 8
Resumo

Trypanosomatids are the etiologic agents of various infectious diseases in humans. They diverged early during eukaryotic evolution and have attracted attention as peculiar models for evolutionary and comparative studies. Here, we show a meticulous study comparing the incorporation and detection of the thymidine analogs BrdU and EdU in Leishmania amazonensis, Trypanosoma brucei, and Trypanosoma cruzi to monitor their DNA replication. We used BrdU- and EdU-incorporated parasites with the respective standard detection approaches: indirect immunofluorescence to detect BrdU after standard denaturation (2 M HCl) and click chemistry to detect EdU. We found a discrepancy between these two thymidine analogs due to the poor detection of BrdU, which is reflected on the estimative of the duration of the cell cycle phases G1, S, and G2. To solve this discrepancy, we increase the exposure of incorporated BrdU using different concentrations of HCl. Using a new value for HCl concentration, we re-estimated the phases G1, S, G2 + M, and cytokinesis durations, confirming the values found by this approach using EdU. In conclusion, we suggest that the studies using BrdU with standard detection approach, not only in trypanosomatids but also in others cell types, should be reviewed to ensure an accurate estimation of DNA replication monitoring. (AU)

Processo FAPESP: 13/07467-1 - CeTICS - Centro de Toxinas, Imuno-Resposta e Sinalização Celular
Beneficiário:Hugo Aguirre Armelin
Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Centros de Pesquisa, Inovação e Difusão - CEPIDs
Processo FAPESP: 14/24170-5 - Dinâmica da replicação do DNA em Trypanosoma cruzi: caracterização do licenciamento e da taxa de replicação
Beneficiário:Marcelo Santos da Silva
Linha de fomento: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Processo FAPESP: 15/10580-0 - Caracterização de checkpoint intra-S em células de Trypanosoma
Beneficiário:Maria Carolina Quartim Barbosa Elias Sabbaga
Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Regular