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(Referência obtida automaticamente do Web of Science, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores.)

Functional and structural evaluation of the antileukaemic enzymel-asparaginase II expressed at low temperature by differentEscherichia colistrains

Texto completo
Autor(es):
de Moura, Werner Alfinito Feio [1] ; Schultz, Leonardo [1] ; Breyer, Carlos Alexandre [1] ; de Oliveira, Ana Laura Pires [1] ; Tairum, Carlos Abrunhosa [1] ; Fernandes, Gabriella Costa [1] ; Toyama, Marcos Hikari [1] ; Pessoa-Jr, Adalberto ; Monteiro, Gisele [2] ; de Oliveira, Marcos Antonio [1]
Número total de Autores: 10
Afiliação do(s) autor(es):
[1] Sao Paulo State Univ UNESP, Inst Biosci, Coastal Campus, BR-11330900 Sao Paulo - Brazil
[2] Pessoa-Jr, Jr., Adalberto, Univ Sao Paulo, Biochem Pharmaceut Technol Dept, Fac Pharmaceut Sci, BR-05508000 Sao Paulo - Brazil
Número total de Afiliações: 2
Tipo de documento: Artigo Científico
Fonte: Biotechnology Letters; JUL 2020.
Citações Web of Science: 0
Resumo

Acute lymphoblastic leukaemia (ALL) affects lymphoblastic cells and is the most common neoplasm during childhood. Among the pharmaceuticals used in the treatment protocols for ALL, Asparaginase (ASNase) fromEscherichia coli(EcAII) is an essential biodrug. Meanwhile, the use of EcAII in neoplastic treatments causes several side effects, such as immunological reactions, hepatotoxicity, neurotoxicity, depression, and coagulation abnormalities. Commercial EcAII is expressed as a recombinant protein, similar to novel enzymes from different organisms; in fact, EcAII is a tetrameric enzyme with high molecular weight (140 kDa), and its overexpression in recombinant systems often results in bacterial cell death or the production of aggregated or inactive EcAII protein, which is related to the formation of inclusion bodies. On the other hand, several commercial expression strains have been developed to overcome these expression issues, but no studies on a systematic evaluation of theE. colistrains aiming to express recombinant asparaginases have been performed to date. In this study, we evaluated eleven expression strains at a low temperature (16 degrees C) with different characteristics to determine which is the most appropriate for asparaginase expression; recombinant wild-type EcAII (rEcAII) was used as a prototype enzyme and the secondary structure content, oligomeric state, aggregation and specific activity of the enzymes were assessed. Structural analysis suggested that a correctly folded tetrameric rEcAII was obtained using ArcticExpress (DE3), a strain that co-express chaperonins, while all other strains produced poorly folded proteins. Additionally, the enzymatic assays showed high specific activity of proteins expressed by ArcticExpress (DE3) when compared to the other strains used in this work. (AU)

Processo FAPESP: 13/08617-7 - Produção de L-asparaginase extracelular: da bioprospecção à engenharia de um biofármaco antileucêmico
Beneficiário:Adalberto Pessoa Junior
Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Temático
Processo FAPESP: 17/19942-7 - Busca de inibidores do sistema peroxirredoxina de patógenos e humanos
Beneficiário:Marcos Antonio de Oliveira
Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo FAPESP: 17/25272-4 - Asparaginase1 de Saccharomyces cerevisiae: investigação dos efeitos funcionais e estruturais da cauda N-terminal
Beneficiário:Gabriella Costa Fernandes
Linha de fomento: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Processo FAPESP: 19/04054-4 - Busca de inibidores do sistema peroxirredoxina 2-Cys típicas de eucariotos: avaliação funcional e estrutural
Beneficiário:Ana Laura Pires de Oliveira
Linha de fomento: Bolsas no Brasil - Mestrado
Processo FAPESP: 14/22039-9 - Caracterização funcional, estrutural e modificação racional da ASPaseM: um novo fármaco para o tratamento da anemia linfóide aguda?
Beneficiário:Leonardo Schultz da Silva
Linha de fomento: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
Processo FAPESP: 16/19245-1 - Avaliação de cepas bacterianas na superexpressão da enzima antileucêmica L-asparaginase de Escherichia coli
Beneficiário:Werner Alfinito Feio de Moura
Linha de fomento: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Processo FAPESP: 17/20291-0 - Caracterização da atividade pró-inflamatória de uma nova serino protease (cdtsp-2) purificada do veneno total de Crotalus durissus terrificus
Beneficiário:Marcos Hikari Toyama
Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo FAPESP: 11/13500-6 - Investigação dos determinantes moleculares envolvidos na interação com os substratos de Tsa1 e Tsa2 de Saccharomyces cerevisiae
Beneficiário:Carlos Alexandre Breyer
Linha de fomento: Bolsas no Brasil - Doutorado