Estudo do processamento da glicoproteína de superfície de 82kDa(GP82) de tripomastigotas metacíclicas de Trypanosoma cruzi

Autor(es)

Cordero Veas, Esteban Mauricio

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: São Paulo. [2003]. 83 f.
• Instituição: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Escola Paulista de Medicina
• Data de defesa: 07 mar. 2003

Membros da banca

Silveira Filho, José Franco da; Grisard, Edmundo Carlos; Gadelha, Fernanda Ramos

• Orientador: Silveira Filho, José Franco da
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica
• Indexada em: Base de Dados PHL-UNIFESP
• Localização: Universidade Federal de São Paulo. Biblioteca Central da Escola Paulista de Medicina; Tese 7407

Resumo

Os tripomastigotas metacíclicos de Trypanosoma cruzi sintetizam uma glicoproteína de superfície estágio-específica de 82 kDa (GP82) que está envolvida na entrada do parasita nas células hospedeiras. A GP82 encontra-se ligada à superfície celular por uma âncora de glicosilfosfatidilinositol (GPI). As proteínas ligadas por GPI são sintetizadas com uma extremidade C-terminal que é substituída por uma âncora GPI numa reação de transamidação que acontece pós-traducionalmente. A seqüência da GP82 que determina a adição da âncora GPI contém 25 aminoácidos distribuídos no sítio w, seguindo-se uma seqüência espaçadora (7 aminoácidos) e uma região mais hidrofóbica (15 aminoácidos). O sítio w, reponsável pela clivagem e adição da âncora GPI, é composto por 3 aminoácidos: o aminoácido w ao qual a âncora GPI é tranferida, é Asp; o aminoácido w+1 é Gly e o aminoácido w+2 é Ser. Visando determinar experimentalmente a seqüência para ancoragem por GPI em T. cruzi, fizemos uma mutação no putativo sítio de clivagem e adição (sítio w) da âncora. Por meio de mutação sítio-dirigida foi gerada uma substituição do aminoácido no sítio w (posição 492), onde o códon GAC foi trocado por TCC, assim o motivo de clivagem e adição Asp-Gly-Ser presente na proteína nativa foi substituído por Ser-Gly-Ser. Para avaliar o processamento de uma proteína com sinal defectiva para adição de GPI, geramos uma GP82 truncada, eliminando todo o sinal C-terminal incluindo-se o sítio c). As duas construções foram clonadas no vetor pTEX e inseridas em epimastigotas (cepa G) por meio de eletroporação. A incorporação do plasmídio foi confirmada por análise de Southern blot após digestão com Xho I, e a transcrição dos genes transfectados por análise de northem blot... (AU)