Mapeamento de um gene de Leishmania major que confere resistência a pentamidina por deleção e inserção de elementos transposicionais

Autor(es)

Adriano C. Coelho ^[1] ; Luiz R. O. Tosi ^[2] ; Paulo C. Cotrim ^[3]

Afiliação do(s) autor(es)

^[1] Universidade de São Paulo. Instituto de Medicina Tropical - Brasil

^[2] Universidade de São Paulo. Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto. Departamento de Biologia Celular e Molecular e Bioagentes Patogênicos - Brasil

^[3] Universidade de São Paulo. Instituto de Medicina Tropical - Brasil

• Tipo de documento: Artigo Científico
• Fonte: Revista do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo; v. 46, n. 2, p. 109-112, 2004-04-00.

Resumo

A Pentamidina (PEN) é um composto alternativo para o tratamento de pacientes com leishmaniose que apresentam resistência ao antimônio, cujo alvo celular continua incerto. Uma abordagem para se identificar prováveis alvos seria a identificação e super-expressão de genes capazes de mediar resistência a PEN. A partir de uma genoteca construída com o DNA de Leishmania major em um vetor - cosmídio que se desenvolve tanto em bactérias como nas células do parasita, isolamos um locus que após transfecção é capaz de produzir resistência a PEN às células do parasita. Almejando o mapeamento desse locus de leishmania, o inserto clonado nesse cosmídio foi deletado através de duas digestões parciais sucessivas com enzimas de restrição, seguida de transfecção em células selvagens, super-expressão gênica, indução e testes funcionais na presença de PEN. Para determinar o gene de Leishmania relacionado com a resistência a PEN, o seqüenciamento de nucleotídeos foi executado após inserção de elementos transposicionais de Drosophila melanogaster no interior do inserto deletado para atuar como 'ilhas de iniciadores'. Descrevemos aqui o mapeamento desse locus, após a inserção transposicional, que além de facilitar o seqüenciamento de nucleotídeos de grandes fragmentos de DNA, permite uma rápida identificação do gene relacionado com esse fenótipo. Experimentos posteriores revelaram neste locus a presença do gene de uma Glicoproteína-P de membrana, cujo papel no metabolismo na Leishmania está sendo analisado. (AU)

• Processo FAPESP: 02/09562-7 - Identificacao e analise de genes / loci de leishmania major relacionados com a resistencia a dois inibidores da biossintese do ergosterol.
• Beneficiário: Paulo Cesar Cotrim
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Processo FAPESP: 97/00541-7 - Sequência e polimorfismo de DNA em microbiologia aplicada
• Beneficiário: Claudio Sergio Pannuti
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Programa Infraestrutura - Equipamentos