PCR fluorescente associada à eletroforese capilar como ferramenta de diagnóstico de bactérias no semen

Autor(es)

Francisca Elda Ferreira Dias ; Cáris Marone Nunes ; Tânia Vasconcelos Cavalcante ; Andréa Azevedo Pires de Castro ; Jorge Luis Ferreira ; José Fernando Garcia

• Tipo de documento: Artigo Científico
• Fonte: Ciênc. anim. bras.; v. 14, n. 3, p. 366-372, Set. 2013.

Resumo

Este estudo avaliou o limiar de detecção da técnica de PCR aliada à eletroforese capilar para diagnóstico da Brucella abortus em sêmen bovino. Doses inseminantes livres de patógenos foram contaminadas experimentalmente com B. abortus em escalas que variavam de 10(0) a 10(7) bactérias/mL e submetidas à extração de DNA pelo método de fenol/clorofórmio. A amplificação por PCR foi realizada utilizando-se oligonucleotídeos iniciadores, previamente descritos na literatura, BF-5'gcgctcaggctgccgacgcaa3' (cromóforo FAM) e BR-5'accagccattgcggtcggta3' para B. abortus.) Os pares de oligonucleotídeos geraram fragmentos de 193 pb. Após PCR, a visualização dos fragmentos foi realizada em gel de acrilamida 8% corada pela prata e por eletroforese capilar fluorescente em equipamento automático de análise de fragmentos de DNA. A detecção de DNA de B. abortus em sêmen bovino através de eletroforese capilar fluorescente foi possível a partir de concentração de 10³ bactérias/mL, enquanto que em gel de poliacrilamida 8% o limite de detecção foi de 10(5) bactérias/mL. A eletroforese capilar demonstrou ser uma alternativa rápida, eficaz e de alta sensibilidade na detecção de DNA de Brucella em sêmen bovino, podendo ser uma valiosa ferramenta para a avaliação da sanidade do rebanho e para o controle de qualidade do sêmen produzido em centrais de inseminação artificial. (AU)

• Processo FAPESP: 01/05486-1 - Identificação de patógenos no sêmen bovino pela técnica de multiplex-PCR fluorescente
• Beneficiário: Francisca Elda Ferreira Dias
• Linha de fomento: Bolsas no Brasil - Doutorado