Novos reguladores de resposta envolvidos na virulência de Pseudomonas aeruginosa

Resumo

Pseudomonas aeruginosa é uma gama proteobactéria que atua como um patógeno oportunista em humanos. Dentre todos os sítios de infecção, as infecções pulmonares em pacientes em unidades de terapia intensiva são as que apresentam as maiores taxas de mortalidade por P. aeruginosa. A capacidade de adaptação a diversos ambientes deve-se ao fato dessa bactéria apresentar diversos uma grande proporção de genes regulatórios em seu genoma. Dentre as cascatas de sinalização, destacam-se os sistemas de dois componentes. A ativação destes sistemas inicia-se com uma proteína sensora que, após sentir um sinal, se auto-fosforila Às custas de ATP. O grupo fosforila então é transferido a um regulador de resposta, que uma vez fosforilado é capaz de mediar uma resposta ao sinal inicial. Existem mais de 70 genes de reguladores de resposta na linhagem de PA14 sendo que nenhum trabalho avaliou globalmente o papel deles na virulência, apesar de alguns sistemas de dois componentes serem bem caracterizados Portanto este projeto pretende compreender o envolvimento desses sistemas na virulência de P. aeruginosa. A primeira linha de defesa contra a infecção pulmonar por P. aeruginosa são os macrófagos, que detectam as bactérias por receptores do tipo Toll, que reconhecem assinaturas moleculares de patógenos como a flagelina e o LPS. Assim, será analisado o envolvimento dos reguladores de resposta na virulência in vitro utilizando-se macrófagos J774, medindo-se a citotoxicidade de mutantes nos reguladores de resposta ainda não caracterizados, bem como a capacidade desses mutantes sobreviverem aos macrófagos e a secreção de citocinas frente a cada mutante. Os mutantes serão caracterizados fenotipicamente por ensaios de motilidade e produção de fatores de virulência e os mais atenuados serão testados in vivo em modelo de pneumonia aguda em camundongos. Pretende-se posteriormente se determinar o regulon desses reguladores de resposta previamente selecionados por proteômica e/ou transcriptômica. A ausência de sistemas de dois componentes em humanos torna estes sistemas alvos interessantes para o desenvolvimento de novos fármacos, portanto sua caracterização desses sistemas e dos fatores regulador por eles poderão trazer informações importantes no combate a infecções por P. aeruginosa.