Avaliação in vitro da entrega do gene da glicoproteína do vírus da raiva através de vetores não-virais protéicos

Resumo

Um dos principais limitantes ao desenvolvimento e aprovação para utilização em humanos das vacinas de DNA é a falta de um vetor ideal de entrega gênica, que seja ao mesmo tempo eficiente e seguro. Embora mais seguros, os vetores não-virais enfrentam uma série de barreiras físicas, enzimáticas e difusionais que limitam a chegada do transgene ao núcleo das células alvo. Essas limitações são ainda mais importantes quando se trata da entrega de genes à macrófagos, interessante do ponto de vista de desenvolvimento de vacinas gênicas. Dando continuidade ao trabalho desenvolvido em nosso grupo, o principal objetivo deste projeto é avaliar o desempenho de vetores não-virais multifuncionais baseados em proteínas recombinantes na entrega de genes à macrófagos (linhagem IC23). Nossa abordagem utiliza a proteína recombinante T-Rp3, uma cadeia leve de dineína modificada, visando assim explorar a capacidade natural dos motores moleculares para transportar cargas da periferia para o interior da célula, através da rede de microtúbulos. Plasmídeos (pDNA) modelo contendo o gene repórter GFP ou da glicoproteína do vírus da raiva (GPV) serão utilizados neste estudo. Combinando diferentes técnicas como espalhamento de luz, potencial zeta, ensaios de interação e transfecção na presença de drogas, poderemos correlacionar as propriedades físico-químicas do complexo proteína-pDNA com o tráfego intracelular e eficiência de entrega gênica. A transfecção de diferentes tipos de células de mamíferos nos permitirá avaliar a eficiência dos nossos vetores para realizar entrega gênica in vitro de células HeLa e macrófagos. Esperamos, assim, aumentar o conhecimento atualmente disponível sobre o uso de proteínas recombinantes como vetores de entrega gênica com aplicação potencial ao desenvolvimento de novas vacinas contra a raiva. (AU)