Quantificação do efeito do espaçamento entre as regiões -35/-10 em promotores sintéticos bacterianos

Resumo

Neste trabalho, pretendemos investigar o efeito do espaçamento entras as regiões reconhecidas pela RNA polimerase bacteriana em conjunto com o fator sigma70. Enquanto que muitos trabalhos na literatura têm investigado o efeito das sequências contidas nas caixas -35/-10 na atividade final dos promotores, poucos estudos visam caracterizar de maneira sistemática o efeito do espaçamento entre essas caixas na atividade promotora. No presente plano de trabalho, serão construías quatro variantes de promotores sintéticos constitutivos (baseados nos promotores PJ100, PJ106, PJ114 e PJ113) contendo um espaçamento entre as caixas -35/-10 variando de 15 a 19 pb. Os 16 promotores resultantes serão clonados em um plasmídeo contendo o gene repórter GFPlva e analisados em uma linhagem selvagem de E. coli. Os dados gerados serão integrados com outros existentes no laboratório para a construção de um modelo de força de promotor baseado na sequência de DNA.