Arcabouços 3D funcionalizados com Aptamers anti-fibronectina na formação do coágulo. Estudo ex vivo e in vitro.

Resumo

No processo de regeneração óssea, o sangue é o primeiro componente a entrar em contato com os biomateriais utilizados. Nesta pesquisa objetiva-se ver os efeitos de Aptamers (oligonucleotídeos curtos capazes de se ligarem seletivamente à proteína alvo) anti-fibronectina (FN) adicionados em arcabouços 3D (SCA), na formação do coágulo sanguíneo e, adicionalmente, na formação óssea. MTT testará a viabilidade celular in vitro de células pré-osteoblásticas (OSB) derivadas de rato (linhagem UMR-106) sobre os SCA com e sem Aptamers anti-FN. O coágulo fisiológico (PhC) será então desenvolvido em modelo animal (rato) sobre os SCA com ou sem Aptamers, caracterizando o estudo ex vivo. Ainda, a fenotipagem do PhC será caracterizada por citometria de fluxo e microscopia eletrônica de varredura. Em outro passo, OSB será cultivado sobre o substrato (SCA, Aptamers e PhC), objetivando observar o efeito do substrato sobre a formação e acúmulo de cálcio e a morfologia 3D dos OSB e PhC por ensaio de mineralização e microscopia confocal, respectivamente. As interações genéticas desencadeadas pela associação dos SCA, Aptamers e PhC sobre o OSB serão investigadas por análise transcriptômica pelo método RNA-seq. Já no estudo in vivo, verificaremos essa associação na formação óssea em ratas. Os grupos experimentais serão 1) controle negativo (sem biomaterial no defeito ósseo - C), 2) Controle (SCA), 3) SCA funcionalizados com Aptamers-anti-FN (SCA+APTantiFN). Todos serão investigados após 5 e 15 dias para observar a diferenciação osteoblástica e neoformação óssea, respectivamente. Dois defeitos críticos serão realizados na calvária: um destinado à análise da densidade e volume ósseo formado por Micro-CT e o outro para análise transcriptômica e processamento histomorfométrico. O perfil genético e a expressão de Runx2 e fosfatase alcalina serão investigados usando os métodos RNA-seq e imuno-histoquímica, respectivamente. Esses achados serão promissores para observar as sinalizações autócrinas e parácrinas do coágulo formado sobre esse biomaterial enriquecido com Aptamer anti-FN, sendo fundamental para desvendar, tanto in vitro como in vivo, os efeitos dessa associação na osteogênese. (AU)