Estabelecimento da metodologia CRISPR-Cas9 e obtenção de plantas nocaute em genes candidatos à reguladores do processamento alternativo em estresse térmico em arroz

Resumo

O arroz é um dos alimentos mais consumidos no mundo, mas o estresse térmico afeta sua produção e a qualidade dos grãos. Para identificar soluções mecanicistas para melhorar o cultivo do arroz sob ameaças de mudanças climáticas, as respostas moleculares da tolerância ao estresse de calor devem ser identificadas. Controles transcricionais e pós-transcricionais estão envolvidos na ampla gama de respostas ambientais em plantas. O processamento alternativo, em particular, é um mecanismo envolvido na defesa da planta contra estresses, mas pouco se sabe como a variação das isoformas transcritas é regulada pelas mudanças de temperatura. Os níveis e a atividade de centenas de fatores de processamento e modificadores de cromatina/DNA mudam em resposta à temperatura, sugerindo envolvimento destes genes na regulação do processo alternativo de plantas em condições de estresse térmico. As proteínas codificadas pelos genes LOC_Os02g40900 e LOC_Os05g30140 em arroz possuem motivos de reconhecimento de RNA e ambos os genes são possíveis candidatos à reguladores do processamento sensíveis ao calor. Este projeto pretende gerar plasmídeos baseados na metodologia CRISPR-Cas 9 e usá-los para transformar arroz, possibilitando assim o estudo da função dos genes LOC_Os02g40900 e LOC_Os05g30140 em plantas de arroz mutantes não-transgênicas.