Purificação de fator viii de coagulação e de proteínta c a partir de plasma humano empregando técnicas cromatográficas

Resumo

Neste projeto pretendemos dar continuidade ao desenvolvimento de processos para a purificação de fator VIII de coagulação a partir do plasma humano. Propomos duas estratégias que possibilitam a purificação de Proteína C, após a separação do fator VIII. Empregamos nestes processos apenas métodos cromatográgicos de purificação, em contra partida aos métodos tradicionais em que se inicia a purificação de proteínas plasmáticas com a separação do crioprecipitado. Atualmente as resinas disponíveis comercialmente possibilitam a aplicação direta do plasma nas colunas cromatográficas, podendo-se, desta forma, evitar o uso de centrífugas de grande porte e de salas refrigeradas. A primeira estratégia proposmos iniciar o processo concentrando as proteínas de interesse em uma coluna de troca iônica. Com base em resultados anteriores, sabemos que grande parte das proteínas plasmáticas podem ser eliminadas nesta etapa. Em seguida empregamos uma resina de afinidade para serina proteases. Nesta resina a proteína C, que é zimogênio de seina protease, é retida, enquanto o fator VIII é recolhido no "flow through". Finalmente, a proteína C é separada das demais proteínas dependentes de vitamina K em uma coluna da afinidade por metal, uma vez que apresenta 15 residuos de histidina expostos. Na segunda estratégia proposta, o processo inicia-se com uma gel filtração para separar o fator VIII das demais proteínas de menor massa molecular. Destas frações, as que contém a Proteína C serão recolhidas e aplicadas a uma coluna de afinidade por metal.