Identificação e caracterização do receptor do peptídeo hormonal ralf e caracterização da proteína interagente semelhante a calmodulina (cml)

Resumo

Os peptídeos hormonais passaram a integrar a biologia vegetal no final da década de 90 e estão envolvidos em processos fisiológicos tais como defesa, diferenciação e desenvolvimento. RALF é um peptídeo ubíquo associado a mecanismos básicos do desenvolvimento das plantas. Sabe-se que o conhecimento da via de sinalização dos hormônios vegetais é fundamental para a elucidação dos mecanismos moleculares envolvidos na regulação das suas funções. Portanto, propõe-se neste projeto o emprego de estratégias que visam a identificação e caracterização de componentes da via de transdução de sinais do RALF, com a finalidade de obter informações sobre a função específica destes peptídeos em plantas. Através do sistema de duplo híbrido de leveduras identificou-se uma proteína semelhante a calmodulina (CML) que interage com o peptídeo RALF. Objetiva-se com esse projeto demonstrar a interação in planta e também estudar a interação RALF-CML através de ensaios pull-down. Esses ensaios proporcionarão a caracterização da interação e dos efeitos do íon Ca2+ na mesma. As variações do Ca2+ intracelular em resposta ao peptídeo RALF também serão avaliadas. Em uma outra abordagem, também visando identificar elementos da via de transdução de sinais, buscar-se-á proteínas de membrana que tenham alta afinidade por RALF. O peptídeo apresenta interação com duas proteínas de membrana cuja única informação disponível é o peso molecular. O proposto possibilitará a identificação de proteínas envolvidas no mecanismo de interação com receptores e, possivelmente, de regulação da atividade do peptídeo por uma proteína semelhante a calmodulina. (AU)