CRIOPRESERVAÇÃO DE EMBRIÕES DE Prochilodus lineatus SUBMETIDOS À ELETROPORAÇÃO E AO ULTRASSOM.

Resumo

Há mais de dois séculos criobiologistas buscam uma eficaz metodologia para preservar a viabilidade das células germinativas e embriões de peixes; sendo que, atualmente, o foco das pesquisas voltou-se ao desenvolvimento de biotecnologias para o congelamento profundo (-196ºC) a fim de preservar "indefinidamente" a bagagem genética das espécies, podendo assim, tornar-se uma ferramenta de grande valia em estudos de repovoamento, na produção intensiva de pescado, para espécies em risco de extinção minimizando a deriva genética, doenças e catástrofes ambientais, auxiliando programas de seleção genética e na formação de bancos genéticos.Contudo, essa biotecnologia para peixes neotropicais só é uma realidade com as células germinativas masculinas, pois seus embriões são complexos sistemas biológicos detentores de diferentes compartimentos, como a blastoderme, um vitelo delimitado por uma camada sincicial circundada pelo espaço Perivitelínico e pela membrana coriônica, que juntos, formam grandes barreiras osmóticas durante os processos de crioconservação. Em outras áreas de pesquisas como fisioterápica, médica e engenharia genética, a membrana plasmática e as diferenças na constituição dos tecidos, também são consideradas grandes barreiras à difusão de medicamentos e fragmentos de DNA, sendo a partir de 1980 mitigadas através das tecnologias de fonoforese (ultrassom) e eletroporação que propiciam a formação de poros reversíveis em suas membranas.Além das barreiras osmóticas, as baixas temperaturas utilizadas, também são grandes barreiras nos protocolos de criopreservação gerando alterações no metabolismo celular e promovendo a nucleação dos cristais de gelo, que rompem a coesão tecidual e as estruturas membranosas. Desta forma, os tratamentos de criopreservação passam a necessitar de soluções crioprotetoras específicas, que penetrem nas células inibindo os cristais de gelo e protejam os componentes celulares das temperaturas reduzidas; entretanto, essas substâncias tornam-se tóxicas aos embriões dependendo do tempo de exposição, temperatura, concentração e estágio embrionário utilizados nos processos. Apesar de todos os esforços desprendidos, nenhum resultado expressivo e reproduzível ainda foi descrito na literatura; sendo comumente relatado para os tratamentos de resfriamento e toxicidade dos crioprotetores, inúmeras injurias ainda pouco estudadas. Normalmente, as larvas pós-tratamento apresentam um corpo reduzido e tortuoso, resultado de uma notocorda sinuosa e uma disfunção do processo de miogênese, como mioseptos incompletos e miomeros fundidos de forma desorganizada, o que é, provavelmente, influenciada pela atuação das soluções crioprotetoras associadas ás baixas temperaturas.Desta forma, entendemos que estudos mais aprofundados são necessários para compreendermos os processos de crioconservação dos embriões de teleósteos; avaliando os efeitos deletérios das soluções crioprotetoras e da baixa temperatura sobre o desenvolvimento embrionário; além de buscar novas tecnologias para aumentar a permeabilidade dos embriões. Assim, objetivamos descrever um protocolo viável de vitrificação de embriões de peixes neotropicais através do uso da eletroporação e do ultrassom, avaliando histologicamente e ultraestruturalmente as injurias sofridas pelos embriões expostos aos tratamentos.