Efeitos do silenciamento de relaxina em um modelo de co-cultura de células de Sertoli e germinativas

Resumo

Relaxina é um hormônio de estrutura semelhante à insulina, que promove seus efeitos após a interação com RXFP1, um receptor acoplado a proteína G. O camundongo knockout de relaxina é infértil, e estudos anteriores de nosso laboratório revelaram que relaxina e RXFP1 estão co-localizados em células de Sertoli, RXFP1 está presente em células da linhagem germinativa, e relaxina estimula a proliferação das células de Sertoli por um mecanismo que envolve ativação das vias MEK/ERK1/2 e PI3K/AKT. Os resultados sugerem que relaxina pode regular a espermatogênese por um mecanismo autócrino e/ou parácrino. Para avaliar o papel da relaxina em estágios iniciais e tardios da espermatogênese temos utilizado um modelo de co-cultura de células de Sertoli e germinativas, provenientes de ratos imaturos, com 7-8 dias de idade. Esse modelo experimental tem permitido avaliar o efeito da relaxina exógena sobre a proliferação e diferenciação de células germinativas. O objetivo do presente estudo é avaliar o efeito do silenciamento da expressão de relaxina na co-cultura. O estudo envolverá as seguintes etapas: 1) Padronização das melhores condições para o silenciamento da expressão de relaxina, avaliando a expressão gênica por PCR em tempo real e a proteica por imunocitoquímica; 2) Efeito do silenciamento da expressão de relaxina sobre a ploidia e proporção de células germinativas e de Sertoli, por citometria de fluxo; 3) Efeito do silenciamento sobre a expressão de marcadores de diferentes fases da espermatogênese, por citometria de fluxo e PCR em tempo real. (AU)