Mecanismos de acao de uma fosfatase alcalina no processo de ossificacao endocondral.

• Processo: 95/08381-3
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 1995
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 1996
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
• Pesquisador responsável: Francisco de Assis Leone
• Beneficiário: Francisco de Assis Leone
• Instituição Sede: Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto (FFCLRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Fosfatase alcalina Metaloenzimas Estreptozotocina Ossificação endocondral
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cromatografia Hidrofobica | Estreptozotocina | Fosfatase Alcalina | Metaloenzima | Ossificacao Endocondral | Placa Ossea

Resumo

A fosfatasse alcalina de placa óssea é uma metaloenzima constituída por duas subunidades idênticas que apresenta características multifuncionais. Durante o processo de indução da enzima, a partir de pó de osso desmineralizado, observa-se o aparecimento de uma forma associada à membrana através da âncora de fosfatidilinositol bem como de uma forma solúvel. Após a remoção da forma ancorada, com fosfolipase C de B. thuringiensis, foi detectada ainda associada à membrana uma ATPase cujo pH ótimo é da ordem de 7.5. Esse modelo também está sendo utilizado no estudo da ossificação em animais diabéticos e os resultados iniciais mostraram que existem algumas variações nas propriedades da fosfatasse alcalina. A fim de se compreender funções dessas diferentes formas (membrana, solúvel e ATPase) os objetivos do presente projeto são: 1. Caracterização estrutural e cinética ATPase remanescente na membrana após a remoção da fosfatasse alcalina. 2. Caracterização cinética da forma solúvel obtida de ratos diabéticos. 3. Caracterização da histerese da enzima solubilizada. 4. Caracterização do sítio de hidrólise do ATP através da associação do ϒ-metlieno ATP (substrato fluorescente) à enzima. (AU)