Expressão e caracterização das metalopeptidases neprilisina (EC 3.4.24.11) e enzima conversora de endotelina 1 (EC 3.4.24.71) em Pichia pastoris, seguida da identificação de novos substratos e/ou inibidores

• Processo: 06/04409-7
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2007
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2010
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica
• Pesquisador responsável: Vanessa Rioli
• Beneficiário: Vanessa Rioli
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 09/10871-3 - "Expressão e caracterização das metalopeptidases neprilisina (EC 3.4.24.11) e enzima conversora de endotelina 1 (EC 3.4.24.71) em Pichia pastoris, seguida da identificação de novos substratos e/ou inibidores"., BP.TT; 08/04736-3 - "Expressão e caracterização das metalopeptidases neprilisina (EC 3.4.24.11) e enzima conversora de endotelina 1 (EC 3.4.24.71) em Pichia pastoris, seguida da identificação de novos substratos e/ou inibidores"., BP.TT
• Assunto(s): Peptídeos Substâncias bioativas Metaloendopeptidases Neprilisina Endotelina-1 Expressão de proteínas Mutagênese sítio-dirigida DNA complementar
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Metaloendoproteases | Neprilisina | Peptideos Bioativos | Biologia molecular e bioquímica

Resumo

O presente projeto pretende desenvolver um sistema eficiente para expressão e purificação de dois importantes alvos terapêuticos, as metalopeptidases ECE-1 (Enzima conversora de endotelina-1; EC 3.4.24.71) e NEP (Neprilisina; EC 3.4.24.11). A expressão dessas enzimas recombinantes será realizada em Pichia pastoris. Também será nosso objetivo realizar mutação sítio-dirigida nos cDNAs que codificam essas enzimas para podermos obter formas cataliticamente inativas, que serão utilizadas na identificação de possíveis novos substratos e/ou inibidores naturais para estas enzimas, a partir de misturas complexas de venenos de peçonhas e tecidos animais. A metodologia a ser empregada para o isolamento desses novos substratos e/ou inibidores será aquela anteriormente descrita (Rioli et al., 2003) e patenteada (Rioli, V e Ferro E.S., registro INPI PI0301511-4, de 16/05/2003) pela proponente. O uso desta estratégia para o isolamento de novos substratos/inibidores se apoia também na recente constatação de que o maior número de drogas recentemente aprovadas, ou aguardando aprovação, pelo FDA são peptídeos de origem natural (Watt, 2006). Desta forma, esta estratégia desenvolvida durante nosso doutoramento que se utiliza de enzimas inativas para o isolamento de novos substratos e/ou inibidores naturais nos parece ainda mais eficiente que as bibliotecas combinatoriais na busca de novos alvos para terapêutica. (AU)