Clonagem e expressão de variantes de LDTI (Leech Derived Tryptase Inhibitor) em sistema 'phage display'

• Processo: 95/09256-8
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Jovens Pesquisadores
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 1996
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 1999
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Aparecida Sadae Tanaka
• Beneficiário: Aparecida Sadae Tanaka
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Auxílio(s) vinculado(s): 98/10828-4 - A human plasma kallikrein inhibitor from boophilus microplus larvae., AR.EXT; 98/10575-9 - Preliminary characterization of a kazal-type serine proteinase inhibitor from caiman crocodilus yacare plasma., AR.EXT
• Bolsa(s) vinculada(s): 97/14193-0 - Efeito de inibidores naturais e recombinantes sobre calicreína plasmática humana, BP.MS
• Assunto(s): Fisiologia do sangue Coagulação sanguínea Fibrinólise Enzimas proteolíticas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Coagulacao Sanguinea
• Publicação FAPESP: https://media.fapesp.br/bv/uploads/pdfs/Investindo...pesquisadores_112_115_116.pdf

Resumo

As proteinases apresentam papel importante em muitos processos fisiológicos, como a coagulação sanguínea, fibrinólise, ativação de complemento e migração celular. O controle de proteases ocorre principalmente por inibidores específicos, sendo estes candidatos a novos e superiores agentes na prevenção e tratamento de muitas doenças, causadas por atividades proteolíticas não controladas. O LDTI é um inibidor de triptase e tripsina purificado de sanguessuga Hirudo medicinalis, pertencente à família tipo-Kazal. Este inibidor é composto de 46 resíduos de aminoácidos, apresenta alta homologia com os inibidores: bedelina B-3, também presente em sanguessuga Hirudo medicinalis e a rodinina, inibidor específico para trombina purificado do inseto Rhodnius prolixus, vetor da doença de Chagas. Variantes de LDTI foram clonados e expressos em Saccharomyces cerevisiae, as proteínas recombinantes apresentaram diferenças de especificidade em relação a diferentes proteinases. O LDTI será utilizado como modelo para estudar os inibidores protéicos da coagulação através de técnicas de engenharia de proteínas. Uma nova técnica será utilizada proporcionando a criação de grandes bibliotecas de mutantes, assim como a seleção destes através de ligação às enzimas em questão (Phage Display), a fim de compreender melhor a relação estrutura e função destes inibidores com as proteinases da coagulação. Estes inibidores poderão, no futuro, constituir a base para o desenvolvimento de anticoagulantes com aplicação terapêutica. (AU)