Caracterização molecular da produção de antocianinas visando a clonagem de um transposon ativo em soja (Glycine max l. )

• Processo: 95/09660-3
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Jovens Pesquisadores
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 1996
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 1999
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Eberson Sanches Calvo
• Beneficiário: Eberson Sanches Calvo
• Instituição Sede: Centro de Biologia Molecular e Engenharia Genética (CBMEG). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Soja Clonagem Genes Antocianinas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Antocianinas | Soja | Transposon | W4-M
• Publicação FAPESP: https://media.fapesp.br/bv/uploads/pdfs/Investindo...pesquisadores_106_112_113.pdf

Resumo

Os transposons vêm se afirmando como a ferramenta mais importante para se identificar e clonar novos genes em plantas. Entretanto, a soja, uma espécie de incontestável importância econômica para o Brasil, não tem desfrutado deste método. Isto porque até o presente momento não há nenhum elemento de transposição clonado em soja que atenda as necessidades básicas (altas taxas de mobilidade e de reinserção no genoma) para serem usados no processo de "gene tagging". Este projeto de pesquisa tem por objetivos (1) a caracterização molecular da produção de pigmentos de antocianinas em flores e hipocótilos de soja e (2) a clonagem de um transposon presente no ateio w4-mutável (w4-m) desta via metabólica. Na sua primeira parte o projeto irá caracterizar molecularmente a produção de antocianinas em linhagens isogênicas de soja com diferentes combinações de cinco dos seis locos (W1, W2, W3, W4, Wm, e Wp) já identificados geneticamente, e que controlam a produção desses pigmentos na espécie. Essa caracterização será feita através da análise cromatográfica (HPLC- High Performance Liquid Chromatography) e identificação dos pigmentos acumulados, da análise da expressão gênica por "Northern blots", e da complementação de hipocótilos de plântulas carregando alelos mutantes por bombardeamento (usando-se o "particle gun") de cDNAs heterólogos. Nestes dois últimos casos irá se explorar o fato de que a grande maioria dos genes envolvidos na síntese de antocianinas já foi clonada em outras espécies, permitindo então o uso de sondas heterólogas nestas análises. No conjunto, essas análises permitirão a identificação molecular dos vários locos, entre eles o W4. Na segunda parte do projeto será feita a clonagem e o sequenciamento do DNA dos alelos W4 e w4-m. A comparação das sequências desses alelos irá permitir a identificação do transposon presente no alelo w4-m. Esse transposon constitui no único transposon geneticamente caracterizado em soja que exibe altas taxas de mobilidade e capacidade de causar mutações em outros locos. Portanto, a clonagem deste elemento de transposição terá um grande impacto para a Genética e Biologia Molecular da soja pois irá permitir a identificação e clonagem de vários outros genes na espécie, entre eles os vários genes de interesse agronômico já identificados geneticamente. (AU)