Proposta de critérios para o estabelecimento do perfil das subpopulações espermáticas como padrão qualitativo em sêmen ovino criopreservado visando a reprodução assistida

• Processo: 11/19081-5
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2012
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2014
• Área do conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Sony Dimas Bicudo
• Beneficiário: Sony Dimas Bicudo
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Leandro Rodello
• Assunto(s): Citometria de fluxo Sêmen animal Criopreservação animal Antioxidantes Ovinos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Antioxidantes | Citometria de fluxo | Criopreservação | lipoperoxidação | Sêmen Ovino | subpopulação espermática | Biotecnologias aplicada à pequenos ruminantes

Resumo

Objetiva-se determinar as subpopulações espermáticas (SE) através de quatro critérios metodológicos (CM) envolvendo o CM1 pela análise computadorizada da cinética espermática (CASA - 5 SE), o CM2 pela avaliação da integridade da membrana plasmática e a reação acrossomal (4 SE), o CM3 pela quantificação de apoptose espermática (4 SE) e o CM4 pela avaliação da capacitação espermática (estabilidade e fluidez das membranas - 3 SE) durante o processo de criopreservação de sêmen ovino suplementado com os antioxidantes Trolox e Catalase e determinar o melhor método de separação e recuperação espermática de sêmen ovino criopreservado através das subpopulações para a utilização em biotecnologias da reprodução assistida. No Experimento 1, serão determinadas SE durante o processo de criopreservação de sêmen ovino suplementado com os antioxidantes Trolox e Catalase, utilizando-se três ejaculados de cada carneiro da raça Dorper (n=10), colhidos por meio de vagina artificial. Serão realizadas nos momentos pós-coleta (M1), pós-refrigeração (M2) e pós-descongelação (M3), as avaliações pela CASA (CM1), e por citometria de fluxo para integridade total das membranas espermáticas pela combinação dos fluorocromos iodeto de propídio (IP) e aglutinina de pisum sativum conjugada ao isotiocionato de fluoresceína (FITC-PSA), a apoptose pela Anexina-V e a capacitação espermática pela combinação dos fluocromos merocianina-540 (M540) e Yo-Pro 1 (CM2, CM3 e CM4, respectivamente) e a lipoperoxidação será avaliada pela técnica dos TBARS. No Experimento 2, será realizado a separação e recuperação espermática pelos métodos de swim-up/dextran e pelo gradiente de Percoll com densidades 70% e 35% suplementados com os antioxidantes Trolox ou Catalase de sêmen ovino criopreservado provenientes do Exp.1 e de centros processadores de material genético, classificando conforme as SE determinadas pelo Exp.1. As avaliações pela CASA e citometria de fluxo serão idem ao Exp. 1 (AU)