Estudo de formas fosforiladas da MMP-2 e o efeito do tratamento com doxiciclina

• Processo: 11/23668-1
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2012
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2015
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Farmacologia - Farmacologia Bioquímica e Molecular
• Pesquisador responsável: Raquel Fernanda Gerlach
• Beneficiário: Raquel Fernanda Gerlach
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto (FORP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 14/17228-7 - Estudo de formas fosforiladas da MMP-2 e o efeito do tratamento com Doxiciclina, BP.TT; 12/05274-9 - Estudo de formas fosforiladas da MMP-2 e o efeito do tratamento com doxiciclina, BP.TT
• Assunto(s): Metaloproteinase 2 da matriz Fosforilação Aterosclerose Doxiciclina
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Doxiciclina | fosforilação | Mmp-2 | Modificações pós-traducionais

Resumo

A regulação das metaloproteinases da matriz extracelular (MMPs) tem sido estudada em virtude do papel fundamental destas zinco-endopeptidases em diversos processos fisiológicos e patológicos. A fosforilação é principal modificação pós-traducional em eucariotos e foi descrita na MMP-2 recombinante produzida em células de ovário de hamster e na MMP-2 presente no sobrenadante de células da linhagem HT1080. Assim, a fosforilação passou a ser considerada como um evento potencialmente modulador da atividade da MMP-2, uma gelatinase já descrita no ambiente intracelular e que tem sido relacionada aos eventos de formação e vulnerabilidade da placa na aterosclerose. Sabendo-se que a aterosclerose é uma doença inflamatória crônica que apresenta ativação de várias proteínas via aumento da fosforilação, formulamos a hipótese de que na aterosclerose haja alterações no balanço da fosforilação da MMP-2, o que poderia ser ainda modificado por ação de inibidores das MMPs. Assim, os objetivos desse trabalho são: 1) verificar a ocorrência da fosforilação da MMP-2 em coração e aorta de coelhos ateroscleróticos, bem como analisar o efeito desta modificação pós-traducional sobre a atividade da MMP-2; 2) verificar se a administração de doxiciclina é capaz de alterar o padrão da fosforilação da MMP-2 observado na aterosclerose. Para isso, a aterosclerose será induzida por hipercolesterolemia alimentar em coelhos New Zealand, cujos corações e segmentos aórticos serão utilizados para estudo através de ensaios de zimografia, western blot, SDS-PAGE na presença de Phos-tagTM e fluorimétricos. Como controle da fosforilação, amostras previamente tratadas com fosfatases e amostras do sobrenadante da cultura de células HT-1080 serão utilizadas nos ensaios. (AU)