Desenvolvimento de uma mistura reacional de baixo custo baseada em SYBR Green para uso em qPCR

• Processo: 17/03263-3
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2017
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2019
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia - Endodontia
• Pesquisador responsável: Rafael Nobrega Stipp
• Beneficiário: Rafael Nobrega Stipp
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia de Piracicaba (FOP). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Piracicaba , SP, Brasil
• Assunto(s): Reação em cadeia da polimerase em tempo real Reagentes SYBR Green
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: PCR quantitativo | qPCR | Reagente | Real Time PCR | Rt-Pcr | SYBR green | Outra Sub-área - Microbiologia e Imunologia

Resumo

A PCR quantitativa (qPCR) é uma técnica amplamente utilizada na investigação biológica. Suas aplicações contemplam inúmeras áreas e vão desde ensaios de quantificações da expressão gênica até o uso em laboratórios clínicos de diagnóstico. Entretanto, as reações utilizam reagentes pré-fabricados importados e são custosas. Neste projeto, pretendemos desenvolver uma mistura reacional com componentes necessários para a qPCR baseada em SYBR green, objetivando (a) a robustez (especificidade, estabilidade, reprodutibilidade, compatibilidade e sensibilidade) (b) o baixo custo e facilidade de montagem e (c) a utilização, sempre que possível, de produtos com fabricação nacional. Para isto, formularemos diversos sistemas tampões com múltiplas combinações de aditivos que terão desempenhos comparados entre si e ao produto industrializado importado. As comparações das reações serão realizadas no aparelho de qPCR StepOne" com pares de primers padronizados e descritos na literatura, em moldes de DNA e de cDNA de vários organismos. Como resultado, esperamos obter uma mistura reacional robusta que possa substituir satisfatoriamente o produto importado e possa ser amplamente utilizada pelos cientistas Brasileiros, com economia estimada em 90%. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

LEI, L.; STIPP, R. N.; CHEN, T.; WU, S. Z.; HU, T.; DUNCAN, M. J.. Activity of Streptococcus mutans VicR Is Modulated by Antisense RNA. JOURNAL OF DENTAL RESEARCH, v. 97, n. 13, p. 1477-1484, DEC 2018. (17/03263-3)

SALES, LUCIANA SOLERA; GUIMARAES, GUSTAVO NARVAES; WIJESINGHE, GAYAN KANCHANA; SILVA MOREIRA, KELLY MARIA; JOIA, FELIPE; STIPP, RAFAEL NOBREGA; AZEVEDO RODRIGUES, LIDIANY KARLA; NOBRE-DOS-SANTOS, MARINES; STEINER-OLIVEIRA, CAROLINA. Addition of hydrogen peroxide to methylene blue conjugated to beta-cyclodextrin in photodynamic antimicrobial chemotherapy in S. mutans biofilm. Photodiagnosis and Photodynamic Therapy, v. 28, p. 226-233, DEC 2019. (17/03263-3)