Vitrificacao de embrioes bovinos produzidos in vivo e in vitro apos lipolise quimica.

• Processo: 07/53505-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2007
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2009
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Fernanda da Cruz Landim
• Beneficiário: Daniela Martins Paschoal
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Assunto(s): Vitrificação Embrião Técnicas in vitro Fertilização Criopreservação
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Criopreservacao | Embrioes | Fertilizacao | Forskolin | Producao In Vitro | Vitrificacao

Resumo

Os embriões advindos de sistemas de produção in vitro (PIV) são mais sensíveis a criopreservação do que embriões produzidos in vivo, resultando em taxas de gestação menores após a transferência, e tal fato pode estar relacionado com o maior conteúdo lipídico encontrado nos embriões produzidos in vitro. Este experimento tem como objetivo geral, estudar a viabilidade de embriões bovinos PIV, submetidos ao processo de vitrificação após lipólise química com forskolin, durante o cultivo embrionário. Associado a isso será realizada a análise ultra-estrutural dos embriões tratados ou não com forskolin para avaliação de sua integridade estrutural. Como controle, serão utilizados embriões produzidos in vivo. Ovários serão maturados, fertilizados e cultivados. Nos primeiros 3 dias de cultivo, o meio será acrescido de 6% BSA e após este período o meio será trocado por solução contendo 10% de SFB. Será utilizado o co-cultivo com células da granulosa. Os embriões serão expostos a soluções de vitrificação na temperatura de 22-24ºC, sendo então colocados em uma gota com 1.4 M de glicerol em PBS por 5 minutos, mudando então para outra gota com 1.4 M de glicerol + 3.6 M de etileno glicol por 5 minutos, e então transferida a solução de vitrificação final, contendo 3.4 M de glicerol + 4.6 M etileno glicol (EG/G). As palhetas serão lacradas e colocadas por 1 minuto dentro de um globete plástico resfriado (10 mm x 120 mm, IMV, Maple Grove, MN, USA) e depois serão mergulhadas em nitrogênio líquido. (AU)