Caracterização de Padrões de Imunofluorescência Apresentando Pontilhado Nuclear de Intensidade Variável

• Processo: 09/04063-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2009
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2011
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina
• Pesquisador responsável: Luiz Eduardo Coelho Andrade
• Beneficiário: Rossana Rassi Alvarenga
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Técnica indireta de fluorescência para anticorpo Autoimunidade Reumatologia Ciclo celular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: auto-anticorpo | Autoimunidade | ciclo celular | imunofluorescência indireta | Reumatologia

Resumo

A história das doenças auto-imunes, em especial aquelas de interesse reumatológico, está intimamente ligada aos auto-anticorpos. Esses elementos séricos têm grande relevância clínica, seja como marcadores diagnósticos, marcadores de subtipo de doença, indicadores prognósticos e, em alguns casos, como parâmetros de monitoração da atividade da enfermidade. Os auto-anticorpos têm se mostrado úteis como sondas moleculares específicas capazes de reconhecer as mais diversas proteínas (auto-antígenos) implicadas em diversas funções celulares. Alguns desses auto-antígenos têm expressão dependente da fase do ciclo celular, tais como PCNA, SG2-NA, p330/CENP-F, RMSA-1, MEV, PSL (p55) e GAPDH. Em geral apresentam um padrão pleomórfico de imunofluorescência indireta em células HEp-2 (FAN-HEp-2). Nesses casos, o que se observa é a variabilidade no padrão morfológico observado nas diversas células do campo microscópico. Em nossa prática corriqueira temos observado algumas amostras que apresentam padrões cuja principal característica é a variação na intensidade de fluorescência entre as várias células observadas. Embora a intensidade de fluorescência varie, a característica morfológica do padrão é invariável. Um desses padrões é alvo de interesse especial por sua frequência relativamente alta e foi denominado por nós, como padrão nuclear pontilhado fino de intensidade ciclo celular dependente (PF-ICCD). O presente estudo pretende definir as características imunológicas dos auto-anticorpos associados ao padrão de imunofluorescência indireta PF-ICCD e a caracterização molecular parcial do(s) respectivo(s) antígeno(s) alvo(s). Para isso utilizaremos kits comerciais de células HEp-2 bem como lâminas com células cultivadas in house, mediante diferentes protocolos de fixação e outras linhagens celulares como substrato para a técnica de IFI a fim de garantir a reprodutibilidade deste padrão. Verificaremos a correspondência entre os padrões de reatividade ao western blot e o padrão morfológico PF-ICCD ao ensaio de FAN-HEp-2. A seguir, caracterizaremos a distribuição isotípica da reatividade PF-ICCD e o comportamento do(s) antígeno(s) alvo(s) associado(s) ao padrão PF-ICCD frente ao pré-tratamento do substrato celular com proteases, tampões hipermolares e nucleases. E, por fim, caracterizaremos a expressão do(s) antígeno(s) alvo(s) associado(s) ao padrão PF-ICCD nas diferentes fases do ciclo celular. Tais achados poderão ter importante repercussão clínica e gerar grandes benefícios aos estudos de biologia celular e molecular.Palavras chaves: auto-imunidade, auto-anticorpo, ciclo celular, imunofluorescência, padrão morfológico nuclear.