Estudo da influência da adição de aminoácidos na expressão da proteína PspA por rE. coli.

• Processo: 10/17047-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2011
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2011
• Área de conhecimento: Engenharias - Engenharia Química
• Pesquisador responsável: Teresa Cristina Zangirolami
• Beneficiário: Gilson Campani Junior
• Instituição Sede: Centro de Ciências Exatas e de Tecnologia (CCET). Universidade Federal de São Carlos (UFSCAR). São Carlos , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 08/05207-4 - Vacina conjugada anti-pneumocócica: estudos sobre a viabilidade de uma vacina polissacarídeo capsular - PSPA, AP.TEM
• Assunto(s): Ácido glutâmico Proteína A de superfície pneumocócica (PspA) Lisina Engenharia bioquímica Alanina
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: ácido glutâmico | adição de aminoácidos | alanina | coli recombinante | Cultivos de alta densidade | E | lisina | PspA | Engenharia Bioquímica

Resumo

Streptococcus pneumoniae é a bactéria causadora de uma variedade de infecções do trato respiratório e de outras infecções invasivas, cujo principal fator de virulência é a cápsula polissacarídica que envolve a célula. As vacinas atualmente em uso são basicamente constituídas por polissacarídeos (PS) livres ou conjugados ao toxóide diftérico, para com isso oferecer proteção para crianças abaixo de 2 anos, o principal grupo de risco. A utilização de antígenos protéicos presentes na superfície do S. pneumoniae apresenta-se como alternativa promissora para aumentar a cobertura oferecida pela vacina conjugada, requerendo menor número PSs de diferentes sorotipos na sua formulação. A Proteína de superfície de pneumococo A (PspA) demonstrou elevada proteção em experimentos de desafio em camundongos e por isso, foi o antígeno protéico selecionado para clonagem e expressão em E. coli recombinante visando à posterior purificação e conjugação com diferentes PSs. A viabilidade econômica dessa vacina depende da otimização da produção de PspA em cultivos de rE. coli. Além das estratégias de cultivo convencionalmente adotadas para alcançar altas densidades celulares, a fase de indução da expressão da proteína também deve ser considerada. Assim, o objetivo da presente proposta é estudar a influência da adição dos aminoácidos presentes em maior proporção na estrutura da PspA na produção da proteína de interesse. Experimentos preliminares para avaliar a influência do pool de aminoácidos selecionados (alanina, glutamato e lisina), das suas concentrações e do melhor momento para a adição dos mesmos serão realizados em cultivos em frascos agitados de rEcoli pET37b+ expressando PspAs dos clados 1 e 3. Estudos complementares serão ainda realizados substituindo o pool de aminoácidos por extrato de levedura para comparação. Finalmente, cultivos em biorreator de bancada com as condições que levarem à melhor produtividade em proteína serão conduzidos.