Detecção de kDNA de Trypanosoma cruzi em portadores de megas digestivos pela técnica de nested PCR

• Processo: 10/05716-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2010
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2010
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Sandra Cecília Botelho Costa
• Beneficiário: Ketti Gleyzer de Oliveira
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Médicas (FCM). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 08/55751-2 - Avaliacao da presenca de dna de trypanosoma cruzi em individuos portadores de megaesofago e/ou megacolon, AP.R
• Assunto(s): Doença de Chagas Trypanosoma cruzi Biologia molecular Reação em cadeia por polimerase (PCR)
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Doença de Chagas | kDNA de Trypanosoma cruzi | Nested PCR | Trypanosoma cruzi | Biologia Molecular

Resumo

Apesar do virtual controle da transmissão vetorial no Brasil, estima-se que cerca de 2 milhões de pessoas estejam infectadas pelo protozoário Trypanosoma cruzi em nosso país. A fase crônica da doença de Chagas, quando sintomática, caracteriza-se por comprometimento cardíaco, digestivo ou neurológico, sendo que o esôfago e o cólon são os órgãos mais atingidos na forma digestiva da doença. O diagnóstico na fase crônica baseia-se em métodos sorológicos que podem apresentar resultados falso-negativos ou inconclusivos dificultando a determinação da etiologia dos megas digestivos. Nestes casos, o tratamento adequado dos pacientes fica comprometido.Considerando que a doença de Chagas é a principal causa do megaesôfago no país e o megacólon chagásico é freqüente em nosso meio, temos como objetivo empregar métodos de biologia molecular baseados na reação em cadeia da polimerase (PCR) para detecção do DNA de T. cruzi em amostras de sangue de pacientes portadores de megas digestivos com sorologia não confirmatória para a doença de Chagas.Uma vez que os resultados apresentados por diversos grupos são bastante variáveis quanto à sensibilidade dos métodos moleculares, faz-se necessária a busca por um protocolo de extração de DNA e alvos apropriados para fins diagnósticos na fase crônica. Em vista disso, pretendemos utilizar a técnica de nested PCR para a região do kDNA padronizada in house para correlacionar os resultados com a nested PCR para a região nuclear e com o real time PCR, definindo assim o protocolo mais adequado para diagnóstico da doença de Chagas no nosso grupo de estudo.