ESTUDO DA PARTICIPAÇÃO DO PARASITA TRYPANOSOMA CRUZI NA LIBERAÇÃO DAS ARMADILHAS EXTRACELULARES DOS NEUTRÓFILOS (NETs)

• Processo: 13/16482-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2013
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2014
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Celular
• Pesquisador responsável: Karina Alves de Toledo
• Beneficiário: Mírian Feliciano da Costa
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências e Letras (FCL-ASSIS). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Assis. Assis , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 12/01522-8 - Estudo da participação do parasita Trypanosoma cruzi na liberação das armadilhas extracelulares dos neutrófilos (NETs), AP.R
• Assunto(s): Trypanosoma cruzi Imunidade inata Inflamação Neutrófilos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: imunidade inata | Inflamação | neutrófilos | Trypanosoma cruzi | Imunidade Inata

Resumo

Doenças desencadeadas por protozoários consistem em grave problema de saúde pública,principalmente devido ao alto índice relativo de mortalidade associado a elas. A Doença de Chagas descrita, pela primeira vez em 1909, por Carlos Chagas e cujo agente etiológico é oTrypanosoma cruzi, pode apresentar manifestações fatais, incluindo inflamação do miocárdio, das meninges e regiões do cérebro. Atualmente, o controle da replicação deste parasita, auxiliado ou não por tratamentos medicamentosos, envolve resposta imunológica intensa e persistente e nela estão incluídas células da imunidade inata como monócitos, eosinófilos e neutrófilos. Um novoparadigma na imunidade inata foi recentemente descrito no qual, neutrófilos liberam seu DNA em resposta ao estímulo infeccioso. A formação destas armadilhas extracelures, denominadas NETs (neutrophil extracellular traps) é um processo ativo, distinto da apoptose e da necrose e envolve resposta imune proinflamatória e antimicrobiana. As NETs rapidamente capturam e matam diversos patógenos, dentre eles bactérias, fungos e os parasitas Leishmania sp e Toxoplasma gondii contribuindo assim para o controle da replicação e a eliminação destes microorganismos pelo hospedeiro. O presente projeto tem como objetivo central investigar se durante a infecção por T.cruzi, neutrófilos do hospedeiro são estimulados a formar e liberar as NETs. O estudo pretende ainda responder questões sobre a eficiência das NETs no controle da parasitemia do T.cruzi, além de direcionar a identificação de possíveis moléculas do parasita envolvidas na indução das NETs. Para tanto, serão empregadas diferentes técnicas de microscopia, citometria de fluxo, eletroforese, cromatografias, espectrofotometria e ensaios in vivo. A execução deste projeto poderá auxiliar no desenvolvimento de novas estratégias no controle da resposta inflamatória durante a infecção por T.cruzi com o objetivo de controlar a carga parasitária e conseqüentementea patogenia associada a ela. Tendo em vista a necessidade de um técnico de nível superior que dará suporte para o bom desempenho do projeto e sendo essas etapas essenciais, o técnico executará as seguintes tarefas no projeto, como sumarizado no cronograma abaixo. Este técnico será treinado pelo coordenador do grupo em questão, aperfeiçoando seus conhecimentos na área. Ao término deste projeto, o técnico estará apto ao ingresso no mercado de trabalho na área de imunologia celular e molecular. Este pedido é condizente com uma bolsa de capacitação técnica, pois os procedimentos citados serão exclusivamente técnicos e rotineiros.CRONOGRAMA DE ATIVIDADES A SEREM REALIZADAS* Preparo de soluções e tampões* manuseio, tratamento e infecção dos camundongos;* isolamento de neutrófilos a partir do sangue periférico humano;* manutenção e preparo do parasita e de seus antígenos solúveis;* procedimentos de imunomarcação e aquisição de dados em microscópio de fluorescência;* isolamento e quantificação de biomoléculas (proteínas, citocinas, DNA);* procedimentos de eletroforese e imunodetecção (Western Blot); e,* organização geral do laboratório.