Caracterização in vitro da Atividade da endonuclease em células espermáticas de bovinos

• Processo: 13/16087-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2013
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2014
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Mayra Elena Ortiz D' Avila Assumpcao
• Beneficiário: Catarina Augusta de Queiroz Nunes
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Biotecnologia da reprodução Recuperação espermática Espermatozoides Endonucleases Técnicas in vitro Bovinos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: bovino | Digestão Plasmidial | endonucleases | espermatozóides | Smgt | Transgenia Animal | Biotecnologia da Reprodução Animal

Resumo

A transferência gênica mediada por espermatozoides (TGME) é um método utilizado para a produção de animais transgênicos, considerado fácil e de baixo custo. Esta técnica utiliza um espermatozoide como vetor para a introdução de DNA exógeno em um oócito durante o processo de fecundação. Ela foi primeiramente utilizada na espécie murina, na qual se observou a ativação dose-dependente de endonucleases espermáticas, em resposta à interação com o DNA exógeno. As endonucleases espermáticas são enzimas presentes no núcleo, que promovem a digestão do DNA exógeno e cromossômico, quando ativadas. Este fenômeno pode ser o responsável pela redução da eficiência da técnica e variações nos resultados. Entretanto, em espermatozoides bovinos submetidos à mesma técnica, não houve evidências de digestão de DNA cromossômico pelas endonucleases. O conhecimento da atividade destas proteínas em bovinos ainda é restrito, o que pode limitar a aplicação e a eficiência da TGME e de outras biotécnicas da reprodução, nesta espécie. Assim, este trabalho propõe avaliar a atividade das endonucleases bovinas por meio de ensaios in vitro de digestão plasmidial, verificando o tempo de início de atividade das endonucleases e a quantidade de DNA exógeno necessária para ativá-las. Os resultados obtidos neste estudo oferecerão subsídios básicos sobre a biologia da célula espermática bovina, possibilitando o aprimoramento de protocolos e o aumento da eficiência de novas biotecnologias como a TGME.