Modulação in vitro da barreira epitelial intestinal mediada pelas junções de oclusão (tight junctions): efeito da exposição a nutrientes (glicose e ácidos graxos), à insulina, e à microflora bacteriana de animais pré-diabéticos.

• Processo: 14/04790-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2014
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2015
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Histologia
• Pesquisador responsável: Carla Beatriz Collares Buzato
• Beneficiário: Victor Augusto Licio Garcia Vilela
• Instituição Sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 13/15676-0 - Modulação in vitro da barreira epitelial intestinal mediada pelas junções de oclusão (tight junctions): efeito da exposição a nutrientes (glicose e ácidos graxos), à insulina, e à microflora bacteriana de animais pré-diabéticos, AP.R
• Assunto(s): Fenômenos fisiológicos celulares
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: barreira epitelial intestinal | diabetes melito tipo 2 | Junção de oclusão | Fisiologia Celular

Resumo

As junções de oclusão (JO) medeiam a interação célula-célula em epitélios, exercendo um papel fundamental de barreira de difusão pela via paracelular no epitélio intestinal, prevenindo a entrada de toxinas e bactérias danosas ao organismo. Tem sido sugerido que alterações na permeabilidade epitelial intestinal estão provavelmente relacionadas ao desenvolvimento da diabetes melito tipo 2; entretanto os mecanismos pelos quais isto ocorre são ainda desconhecidos. Os objetivos do presente projeto são: 1) investigar o efeito direto de componentes encontrados em alta concentração na dieta hiperlipídica/hipercalórica (glicose e ácidos graxos), utilizada em modelo animal de diabetes tipo 2, ou que podem estar aumentados/alterados no estado pré-diabético (glicose, ácidos graxos, insulina e microflora) sobre a função de barreira epitelial in vitro; e 2) avaliar os mecanismos intracelulares envolvidos no comprometimento das junções de oclusão nestas condições experimentais. Para isto serão utilizadas as linhagens de células epiteliais, Caco-2 (células de adenocarcinoma coloretal humano), IEC-6, IEC-18 (intestino delgado de rato) e MDCK (derivadas das células renais caninas). Para análise da função de integridade da barreira epitelial e estrutura/bioquímica da JO serão empregados métodos eletrofisiológicos, bioquímicos (medida de resistência elétrica transepitelial e de fluxo transepitelial de marcadores extracelulares), de imunocitoquímica (para localização celular de proteínas da junção de oclusão, tais como claudinas, ocludina, tricelulina e ZO-1), e de biologia molecular (Western Blot e qPCR para determinar o grau de expressão gênica e proteica das proteínas das JO). O desenvolvimento do presente projeto será fundamental para subsidiar as pesquisas no nosso laboratório empregando modelo in vivo de diabetes tipo 2, além de contribuir com estudos posteriores sobre os mecanismos de regulação da barreira epitelial intestinal e sua relação com o desenvolvimento de diabetes.