Efeito in vitro da cafeína no metabolismo e expressão gênica de células osteoblásticas originárias da medula óssea de ratas ovariectomizadas

• Processo: 14/19679-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2014
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2017
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
• Pesquisador responsável: Karina Fittipaldi Bombonato Prado
• Beneficiário: Carolina Alves Freiria de Oliveira
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto (FORP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Biologia celular Osteoporose Medula óssea Remodelação óssea Cultura de células Osteoblastos Reação em cadeia por polimerase (PCR) Técnicas in vitro Modelo experimental
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cafeína | osteoblastos | osteoporose | ovaroectomia | ratas | Cultura da células

Resumo

A remodelação óssea garante a renovação do tecido ósseo e o armazenamento de moléculas essenciais como o cálcio e o magnésio. O processo envolve a atuação de proteínas, hormônios e outras substâncias capazes de ativar o funcionamento de osteoblastos e osteoclastos. Um desequilíbrio neste processo pode causar a osteoporose, uma doença cada vez mais frequente em uma população que atualmente tem maior longevidade e que provoca, principalmente em mulheres com redução na carga hormonal, a perda de densidade óssea. O fator nutricional tem influência no desenvolvimento da osteoporose, entre eles o hábito de consumir café, muito presente na vida do brasileiro. A cafeína encontrada nesta bebida é amplamente encontrada em diversos outros produtos consumidos pela população e tem grande importância econômica. Considerando isso, o projeto tem por objetivo avaliar o efeito in vitro da cafeína no metabolismo de células osteoblásticas da medula óssea em um modelo experimental de osteoporose. Ratas da variedade Wistar serão submetidas ao processo de ovariectomia bilateral de acordo com protocolos experimentais bem estabelecidos na literatura. Após 60 dias do processo cirúrgico, células da medula óssea serão coletadas do fêmur das ratas e colocadas em garrafas com meio de cultura adequado para estas células. Após a confluência, as células serão cultivadas em placas de 24 poços e divididas em quatro grupos experimentais: 1) controle/C (sem indução da osteoporose e sem adição da cafeína no meio); 2) controle/Cc (sem indução da osteoporose e com adição de cafeína no meio); 3) ovariectomizado/Ovx (sem adição de cafeína no meio); 4) ovariectomizado/Ovxc (com adição de cafeína no meio). Após os tempos experimentais, serão analisados os seguintes parâmetros: proliferação e viabilidade celular, quantidade de proteína total, atividade de fosfatase alcalina, detecção e quantificação de nódulos mineralizados e expressão de genes relacionados à atividade osteoblástica através de PCR em tempo real.