Avaliação aos microscópios de fluorescência e eletrônico de transmissão do comportamento dos mitocôndrios de células apoptóticas da linhagem HeLa estimuladas pelos agentes apoptogênicos estaurosporina ou camptotecina.

• Processo: 15/02857-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2015
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2016
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Biologia Geral
• Pesquisador responsável: Antonio Sesso
• Beneficiário: Maiara Gottardi
• Instituição Sede: Instituto de Medicina Tropical de São Paulo (IMT). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 13/22816-2 - Alterações estruturais e citoquímicas que precedem, acompanham e sucedem a permeabilização irreversível da membrana mitocondrial interna em células HeLa, PC-12 e COS-7 apoptóticas. estudo microscópico e por citometria de fluxo, AP.R
• Assunto(s): Biologia celular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: HeLa cell | Biologia Celular

Resumo

Não há consenso se em células HeLa apoptóticas por exposição à estaurosporina, a liberação para o citoplasma das proteinas que residem no espaço intermembranoso mitocondrial (PEIM) precede ou não a perda da permeabilidade seletiva da membrana mitocondrial interna (MMI). Em 02/2013 observamos em HeLa expostas à estaurosporina 0,1 µM/6h mitocôndrios com ruptura da membrana externa nas etapas iniciais, intermediárias e avançadas do processo apoptótico. Esses resultados favorecem a concepção que a liberação das PEIM é precedida pelo colapso da normalmente relativa impermeabilidade da MMI. As alterações estruturais e citoquímicas das células HeLa e COS-7 submetidas à estaurosporina (0,1, 0,5 e 1,0 µM) após o estímulo apoptogênico serão quantificadas e cotejada. As alterações morfológicas ao microscópio eletrônico de transmissão (MET) dispostas em cinco estágios apoptótico (ea1-ea5) desde sinais estruturais de apoptose em células sem fenótipo nuclear apoptótico até o estágio que serão comparadas com alterações citoquímicas anotadas ao microscópio de fluorescência e ao citômetro de fluxo. O cotejo permitirá identificar em qual dos sucessivos estágios estruturais ocorre o evento apoptótico sinalizado por uma dada reação citoquímica. Como corolários esperamos saber em cada uma das linhagens estudadas se: 1 - A liberação do citocromo c para o citoplasma precede é concomitante ou interior à perda da permeabilidade seletiva da membrana mitocondrial interna; 2 -O potencial transmembranoso mitocondrial se mantem, em HeLa e COS-7 com estaurosporina após saída inicial do citocromo c. Se sim, o potencial mantido é abolido na presença de oligomicina ?(ADENDA p. 21). Nesse caso, o fluxo reverso varia com a dose de estaurosporina?; 3 - Existe correlação temporal ou dose dependente em HeLa e Cos-7 entre a saída do citocromo c e a incidência de mitocôndrios ou com ruptura da membrana mitocondrial externa (MME) e/ou com "crista remodeling"; Serão ainda avaliados nas amostras estimuladas durante 6h das 3 linhagens celulares, por microscopia e citometria, os níveis de reatividade de elementos do sistema lisossômico e das espécies reativas do oxigênio.