Aplicação de técnicas de engenharia tecidual para o desenvolvimento de modelos de cultura-3D realistas

• Processo: 19/05157-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2019
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2019
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia
• Pesquisador responsável: Diana Gabriela Soares dos Passos
• Beneficiário: Leandro Edgar Pacheco
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia de Bauru (FOB). Universidade de São Paulo (USP). Bauru , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 16/15674-5 - Associação de técnicas de engenharia tecidual para modulação da regeneração de tecidos mineralizados sob inflamação degenerativa: análise em modelos de cultura-3D em biorreator de perfusão e inflamatórios em animais, AP.JP
• Assunto(s): Biologia celular Células-tronco Cultura de células Engenharia tecidual
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Células tronco | cultura celular | Engenharia tecidual | Biologia Celular

Resumo

Atualmente, busca-se o desenvolvimento de modelos de estudo in vitro que mimetizem as condições clínicas para análise de biomateriais utilizados nas áreas médica e odontológica, com o objetivo de minimizar o número de animais empregados na experimentação científica. Dentro deste contexto, o emprego de órgãos ou tecidos submetidos ao processo de descelularização tem ganhado destaque, como uma técnica empregada na engenharia tecidual que pode ser transferida para o desenvolvimento de modelos de estudo in vitro realistas. A associação do cultivo celular sobre tecidos descelularizados em sistema de biorreator de perfusão é capaz de otimizar a deposição tecidual in vitro, visto que as respostas celulares são estimuladas em um ambiente dinâmico, simulando àquelas condições encontradas no organismo. Desta forma, o presente projeto de pesquisa visa o desenvolvimento de modelos de estudo in vitro de tecidos mineralizados (osso e dentina), baseados na associação de técnicas de descelularização tecidual e cultivo de células tronco em biorreator de perfusão. Dois construtos teciduais serão obtidos: 1) construto ósseo: blocos de osso trabecular serão obtidos a partir da mandíbula de novilhos. As trabéculas ósseas serão limpas e descontaminadas, seguido protocolo de descelularização por injeção de detergentes. Os blocos serão posicionados nas câmaras de perfusão acopladas à um biorreator. Células tronco da medula óssea de seres humanos (BMSC) serão injetadas no sistema em suspensão, em co-cultura ou não com células endoteliais (HUVEC) sendo o conjunto incubado por até 2 meses; 2) construto dentino-pulpar: o tecido pulpar obtido de incisivos bovinos será coletado a partir de animais abatidos, sendo o mesmo desinfetado e descelularizado. O tecido será então posicionado no interior da câmara pulpar coronária de terceiros molares humanos extraídos. Células tronco pulpares humanas (DPSCs) serão semeadas na superfície do tecido pulpar, em co-cultura ou não com as HUVECs, sendo o conjunto incubado em biorreator com perfusão (2 meses). Para ambos construtos, a efetividade do processo de cultivo celular será avaliada em diferentes períodos através da obtenção de cortes e colorações histológicas, análises por imunohistoquímica e imunofluorescência, bem como por microscopia eletrônica de varredura.