Avaliação de enzimas TesB melhoradas por evolução dirigida para aumentar o direcionamento de intermediários metabólicos de Pseudomonas sp. LFM046 para a produção de 3-hidroxiácidos

• Processo: 21/11068-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2022
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2023
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Pesquisador responsável: José Gregório Cabrera Gomez
• Beneficiário: Vital Pegorin Oliveira
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Engenharia metabólica Dieta cetogênica Bioprodutos Hidroxiácidos Enzimas Pseudomonas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biologia molecular | bioprodutos | Engenharia metabólica | Pseudomonas | TesB | 3-hidroxiácidos | Engenharia Metabólica

Resumo

Os 3-hidroxiácidos (3HA) são compostos intermediários produzidos por diversos organismos, entre eles as bactérias do gênero Pseudomonas, onde servem como monômeros na via metabólica de produção de polihidroxialcanoatos (PHA), um polímero com uso potencial como bioplástico, e de ramnolipídeos (RL), um biossurfactante. Nessas vias, os 3HAs se encontram ligados à coenzima A (CoA) ou a proteína carreadora de grupos acil (ACP) por uma ligação tioéster, impedindo que esse composto seja secretado para fora da célula; para obter uma concentração maior dessas moléculas no meio, é necessário clivar esta ligação, permitindo assim que ela saia da célula. O projeto a seguir propõe-se a usar cepas mutantes de Pseudomonas, incapazes de sintetizar PHA ou RL, testando tioesterases (TesB) de pelo menos duas linhagens bacterianas diferentes (Escherichia coli e Pseudomonas putida). O gene codificando uma das tioesterases será submetido a processo de evolução dirigida na busca de enzimas mais eficientes e com especificidades peculiares (ACP ou CoA, diferentes 3HA). Os 3HAs presentes em PHA ou RL estão sempre na configuração "R", sendo consideradas importantes moléculas precursoras para biossíntese de compostos biologicamente ativos, além disso, também têm sido considerados como importantes componentes da alimentação cetogênica.(AU)