Estabelecimento de métodos para Clonagem de embriões e Edição gênica em Zigotos suínos por meio de técnicas de micromanipulação e microinjeção.

• Processo: 22/11147-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2022
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Animal
• Pesquisador responsável: Silvano Mario Attilio Raia
• Beneficiário: André Santos Costa
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 21/11872-5 - Centro de Ciência para o Desenvolvimento em Xenotransplante, AP.CCD
• Assunto(s): Engenharia genética
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Clonagem de Suínos | engenharia genética | Xenotranplante | Embriologia e Edição Gênica

Resumo

A produção de porcos geneticamente modificados a serem utilizados no xenotransplante depende de um amplo domínio de tecnologias de reprodução. Em suínos, esse conjunto de tecnologias ainda é subdesenvolvido em comparação com outras espécies. Para a obtenção dos embriões geneticamente modificados, nosso laboratório tem utilizado a Transferência Nuclear de Células Somáticas (TNCS), também é conhecida como clonagem, que consiste na injeção de uma célula (cujo DNA genômico foi previamente modificado) no interior de um oócito enucleado utilizando micromanipuladores (Eppendorf), para a enucleação dos oócitos. Neste projeto propomos o aprimoramento da técnica de TNCS com a utilização do Laser LYKOS (Hamilton Thorne) combinada aos micromanipuladores. O laser poderá proporcionar maior agilidade e rapidez nas etapas de enucleação e reconstituição dos oócitos micromanipulados, pois a janela de tempo que o protocolo de clonagem permite para estas etapas do processo é muito curta, além de ser um fator importante que interfere na qualidade dos embriões e nas taxas de clivagem e blastocistos. Sendo imprescindível o aprimoramento de tais técnicas para que possamos obter sucesso na obtenção dos embriões clones. Em paralelo implementaremos a técnica de edição genética por CRISPR/Cas9 diretamente em embriões suínos imediatamente após a fecundação (fase de zigoto), introduzindo-se os componentes de edição durante a janela de tempo entre a fusão dos gametas e a primeira divisão embrionária. A edição via CRISPR-Cas9 em zigotos nos fornece uma alternativa viável para obtenção dos suínos geneticamente modificados em uma única etapa, levando ao rápido estabelecimento dos animais para a aplicação no xenotransplante. Além disso, a equipe do projeto proposto possui grande experiência técnica na área, o que dá viabilidade ao processo. A utilização destes dois métodos para obtenção de embriões geneticamente modificados visa estabelecer qual será a alternativa mais viável de ser aplicada de forma padrão em nosso sistema de produção de embriões suínos. No geral, esse projeto tem a finalidade contribuir com o estabelecimento um sistema de produção in vitro de embriões que permita o progresso da TNCS e da edição genética em zigotos, bem como o avanço na produção de suínos geneticamente modificados para aplicação em xenotransplantes no Brasil.