Produção e transferência de embriões geneticamente modificados para a produção de suínos doadores de órgãos

• Processo: 22/11459-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2022
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Silvano Mario Attilio Raia
• Beneficiário: Michelle Silva Araujo Volpato
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 21/11872-5 - Centro de Ciência para o Desenvolvimento em Xenotransplante, AP.CCD
• Assunto(s): Suínos Transferência de embriões
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Suínos | Transferência de embriões | xenotransplante | Biotecnologia animal

Resumo

A produção de suínos geneticamente modificados com a finalidade de produzir órgãos compatíveis para transplante a humanos é um procedimento que envolve várias etapas, as quais requerem técnicas de manipulação do genoma suíno, transferência dos embriões geneticamente modificados, e o nascimento de animais hígidos e livres de patógenos. Os avanços das pesquisas na área da engenharia genética proporcionaram a descoberta de novas ferramentas moleculares de edição do genoma, como o CRISPR/Cas9, o qual permite acrescentar ou remover genes de interesse evitando, por exemplo, reações imunológicas indesejadas (p. ex. reação imunológica hiperaguda) em receptores humanos de órgãos 5-8. Além da CRISPR/Cas9, outras técnicas para a produção de porcos geneticamente modificados também estão sendo utilizadas, como a transferência nuclear de células somáticas previamente editadas. Entretanto, a técnica de produção in vitro de embriões na espécie suína ainda não possui taxas satisfatórias de produção de blastocistos e de sucesso após a transferência, devido à polispermia, reconhecimento materno da gestação, técnica utilizada para a transferência dos embriões, local de deposição dos embriões, dentre outros fatores, necessitando de maior aprimoramento desta técnica e dos eventos subsequentes. Assim, mesmo sendo uma realidade atual, a produção de suínos geneticamente modificados ainda é um grande desafio, pois o seu sucesso depende da produção de embriões viáveis em número suficiente que sobrevivam ao procedimento de transferência e ao desenvolvimento embrionário intrauterino, resultando no nascimento de leitões saudáveis. Portanto, o presente trabalho tem como objetivo produzir embriões suínos in vitro e in vivo geneticamente modificados, os quais serão transferidos a receptoras suínas, para o nascimento de leitões suínos. Para tal, serão utilizadas marrãs cíclicas e porcas suínas previamente selecionadas e sincronizadas, a serem utilizadas como doadoras e/ou receptoras de embriões geneticamente modificados. Embriões produzidos in vivo serão colhidos por lavagem retrógrada do oviduto ou ponta do corno uterino, enquanto os embriões in vitro serão obtidos a partir da fertilização in vitro de oócitos provenientes de ovários de abatedouros. Posteriormente, os embriões produzidos in vivo e in vitro serão submetidos a procedimentos de edição genética e, por fim, transferidos ao oviduto (zigotos e embriões até 4 células) ou ponta do corno uterino (embriões de oito células a blastocistos) de receptoras previamente sincronizadas. Trinta dias após a transferência dos embriões, será realizado diagnóstico gestacional ultrassonográfico. Ao final do período gestacional, as porcas serão submetidas ao procedimento de histerectomia para retirada dos fetos em ambiente estéril, prevenindo assim a contaminação dos leitões por patógenos maternos durante a passagem pelas vias fetais no momento do parto. Os leitões receberão cuidados neonatais e serão mantidos separados das porcas, sendo amamentados artificialmente e monitorados diariamente.